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β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動,，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0360
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：
試劑一：臨用前取1支加1.6 mL蒸餾水溶解，用不完的試劑2-8℃保存 4周,；
標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg無水*糖,。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解，配制成10 mg/mL葡萄糖溶液備用,，2-8℃保存2周,。
產(chǎn)品說明：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.39)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解,。在植物染病或處于其他逆境條件下,，可誘導(dǎo)細胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA活性測定廣泛應(yīng)用于植物病理和逆境生理研究,。
β-1,3-GA水解昆布多糖,，內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產(chǎn)生還原末端,，通過測定還原糖生成速率,，來計算其酶活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機,、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱,、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿,、研缽/勻漿器,、超聲破碎儀、冰和蒸餾水,。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液）,，進行冰浴勻漿。12000g,，4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。

2. 細菌或細胞：收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200w超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次）；12000g 4℃離心10min,，取上清,，置冰上待測。

二,、測定步驟

1. 分光光度計預(yù)熱30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至540nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至1,、0.8、0.6,、0.4,、0.2mg/mL。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表

實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

1. 樣本測定（在1.5mL EP 管中依次加入下列試劑）

充分混勻,，沸水浴5min（蓋緊,，防止水分散失），流水冷卻,，540nm 處記錄各管吸光值A,，ΔA=A 測定-A對照。每個測定管需設(shè)一個對照管,。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需做1-2次,。
如果吸光值大于2，可以用提取液對樣本稀釋后測定（計算公式乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)）,。
三,、β-1,3-GA活性計算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管吸光度x（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）和濃度（y,，mg/mL）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,，將ΔA帶入公式中計算出樣本中產(chǎn)生的還原糖的含量y值（mg/mL）。
2,、β-1,3-GA活性計算：

1. 按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg組織蛋白每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位,。
β-1,3-GA活性 (U/mg prot)=(y×V1)÷(V1×Cpr)÷T=y÷Cpr

1. 按樣本質(zhì)量計算

單位的定義：每g組織每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位。
β-1,3-GA 活性(U/g 質(zhì)量)=(y×V1)÷(W×V1÷V2)÷T=y÷W

1. 按細菌或細胞數(shù)量計算

單位的定義：每1萬個細胞或細菌每小時產(chǎn)生1mg還原糖定義為一個酶活性單位,。
β-1,3-GA 活性(U/10⁴ cell)=( y×V1)÷(500×V1÷V2)÷T=0.002×y
V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.1mL；V2：加入提取液體積,，1mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；T：反應(yīng)時間,，60min=1h,；500：細菌或細胞總數(shù)，萬,。

相關(guān)發(fā)表文獻：

1. X Niu,Q Xu,W Wang,et al. The antifungal activity of a thaumatin-like protein from oyster Crassostrea gigas.

Invertebrate Survival Journal. June 2018;(IF0.967)
參考文獻：

1. Mohammadi M, Karr A L. Beta-1, 3-glucanase and chitinase activities in soybean root nodules[J]. Journal of plant physiology, 2002, 159(3): 245.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0360/BC0365  β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性檢測試劑盒
BC2550/BC2555  α-葡萄糖苷酶（α-GC）活性檢測試劑盒
BC2560/BC2565  β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性檢測試劑盒
BC2570/BC2575  α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性檢測試劑盒
 

β-1,3葡聚糖酶活性檢測 糖代謝  β-1,3葡聚糖酶活性檢測 糖代謝