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谷*酸（Glu）含量檢測(cè)試劑盒說明書（WST法）

微量法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作,。

貨號(hào)：BC5215

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1,、 試劑三：臨用前取1瓶加入6mL試劑一，用不完的試劑-20℃分裝保存4周,，避免反復(fù)凍融,；

2、 試劑四：臨用前取1支加入0.5 mL試劑二,，用不完的試劑-20℃分裝保存2周,，避免反復(fù)凍融；

3,、 標(biāo)準(zhǔn)液：10 μmol/mL谷*酸標(biāo)準(zhǔn)品,。

產(chǎn)品說明：

Glu廣泛存在于動(dòng)物,、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，不僅是組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸之一,，而且通過轉(zhuǎn)氨基作用參與多種氨基酸合成，是生物體內(nèi)主要氨基來源之一,。此外,，Glu還是味精的主要有效成分,，常用做食品添加劑以及香料生產(chǎn),。

谷*酸脫氫酶（GDH）催化谷*酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH₄⁺,，在1-mPMS作用下,，WST-1可與NADH 反應(yīng)，產(chǎn)生水溶性formazan,，計(jì)算谷*含量,。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè),。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、微量玻璃比色皿/96孔板,、研缽/勻漿器/超聲破碎儀、冰,、蒸餾水,。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

細(xì)菌,、細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一,，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200w，超聲3s,，間隔10s,，重復(fù)30次），10000g,，常溫離心10min,，取上清待測(cè)。

組織：稱取約0.1g組織,，加入1mL試劑一,，進(jìn)行冰浴勻漿,，10000g，常溫離心10min,，取上清待測(cè),。

液體：直接測(cè)定。（若有渾濁則離心后取上清測(cè)定）

二,、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm，分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水分別稀釋為0.625,，0.3125，0.15625,，0.07813,，0.039、0.0195,、0.01,、0.005、0.0025μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：

實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需40µL標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

4. 操作表：

三、谷*酸含量計(jì)算

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（x,，µmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（y,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)），建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,，將ΔA代入方程得到x（µmol/mL）。

2. 谷*酸含量計(jì)算：

（1）按照蛋白濃度計(jì)算：

谷*酸含量（µmol/mg prot）=x×V樣本÷（Cpr×V樣本）=x÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算：

谷*酸含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W

（3）按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

谷*酸含量（μmol/10⁴ cell）=x×V樣本÷（500÷V樣總×V樣本）=0.002x

（4）按照液體體積計(jì)算：

谷*含量（μmol/mL）=x×V樣本÷V樣本=x

V樣總：加入提取液體積,，1mL,；V樣本：加入的樣本體積，0.04mL,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500萬。

注意事項(xiàng)：

1,、如果測(cè)定吸光值超過線性范圍吸光值,，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進(jìn)行測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1,、稱取約 0.1g 鼠肺,，加入 1mL試劑一，冰浴研磨,，10000g,，常溫離心10min取上清，待測(cè),。之后按照測(cè)定步驟操作，用 96 孔板測(cè)得計(jì)算 ΔA =A2 -A1=0.449-0.384=0.065,，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.5338x+0.0091,，根據(jù)標(biāo)曲得出x=0.036，谷*酸含量得：
*氨酸含量（µmol/g 質(zhì)量）=x×V樣本÷（W÷V樣總×V樣本）=x÷W=0.36µmol/g,。

2,、吸取0.04 mL羊血清，按照測(cè)定步驟操作,，用 96 孔板測(cè)得計(jì)算ΔA =A2-A1=0.379-0.105=0.274,，標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.5338x+0.0091，根據(jù)標(biāo)曲得出x=0.173,，谷*酸含量得：
谷*酸含量（μmol/mL）=x×V樣本÷V樣本=x=0.173μmol/mL,。

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

[1] Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019;162:364-373.(IF3.712)

參考文獻(xiàn)：

[1] Beck R, Malthe-S?renssen D, Andreassen J P. Polycrystalline growth in precipitation of an aromatic amine derivative and l-glutamic acid[J]. Journal of crystal growth, 2009, 311(2): 320-326.

相關(guān)系列產(chǎn)品：

BC0290/BC0295  脯*酸（Pro）含量檢測(cè)試劑盒

BC0180/BC0185  半胱*酸（Cys）含量檢測(cè)試劑盒

谷*酸（Glu）含量檢測(cè)試劑盒 谷*酸（Glu）含量檢測(cè)試劑盒