目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>糖代謝系列>> BC2630-50T/24S果膠酶活性檢測試劑盒 糖代謝
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/24樣 |
| 貨號 | BC2630 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 果膠酶測試 |
果膠酶活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動,，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2630
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一A | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑一B | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑一：將試劑一A倒入試劑一B于50℃水浴中溶解（期間可拿出振蕩數(shù)次）,。該試劑易長菌,，配制完成后可-20℃分裝保存，可保存12周,。
2,、 標(biāo)準品：10mg半乳糖醛酸。臨用前加入0.943mL蒸餾水,，配成50μmol/mL的標(biāo)準液,。
產(chǎn)品說明：
果膠酶（pectinase）是分解果膠的酶類，包括原果膠酶,，果膠酯酶,，多聚半乳糖醛酸酶和果膠裂解酶四大類，廣泛存在于高等植物果實和微生物中，是水果加工中最重要的酶,。
果膠酶水解果膠生成半乳糖醛酸,，半乳糖醛酸與DNS試劑反應(yīng)生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì)，測定540nm處吸光值變化可計算得果膠酶活性,。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計,、臺式離心機,、水浴鍋、1mL玻璃比色皿,、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水,。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g,，4℃,，離心10min,，取上清置于冰上待測,。
2,、菌類：按照細菌數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌加入1mL提取液）,，冰浴超聲波破碎細菌（功率300w,，超聲3秒,，間隔7秒,，總時間3min）,；然后10000g,，4℃,，離心10min，取上清置于冰上待測,。
3,、液體：直接檢測。
二,、測定步驟
1,、 可見分光光度計預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至540nm,，蒸餾水調(diào)零,。
2、 將50μmol/mL 標(biāo)準液用蒸餾水稀釋為6、5,、4,、3、2,、1 μmol/mL的標(biāo)準溶液備用,。
3、 取125μL樣本沸水浴10min備用,。
4,、 樣本測定（在1.5mL離心管中）：
試劑名稱 | 對照管 | 測定管 | 標(biāo)準管 | 空白管 |
試劑一（µL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
50℃水浴溫育5min | ||||
標(biāo)準溶液（µL） | - | - | 125 | - |
樣本（µL） | - | 125 | - | - |
蒸餾水（µL） | - | - | - | 125 |
煮沸樣本（µL） | 125 | - | - | - |
混勻，50℃水浴反應(yīng)30min,，馬上沸水浴5min,，冷卻后8000g，常溫離心10min,，取上清,。 | ||||
上清液（µL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
試劑二（µL） | 500 | 500 | 500 | 500 |
沸水浴5min，冰浴冷卻終止反應(yīng),，測定540nm處吸光值A,，計算ΔA=A測定管-A對照管，ΔA標(biāo)準=A標(biāo)準管-A空白管,。每個測定管需設(shè)一個對照管,。 | ||||
三、果膠酶活性計算
1,、 標(biāo)準曲線的繪制：
以各個標(biāo)準溶液的濃度為x軸，其對應(yīng)的ΔA標(biāo)準為y軸,，繪制標(biāo)準曲線,，得到標(biāo)準方程y=kx+b，將ΔA帶入方程得到x（μmol/mL）,。
2,、 果膠酶活性的計算：
（1）按蛋白濃度計算
酶活定義：在50℃，pH3.5條件下,，每毫克蛋白每小時分解果膠產(chǎn)生1μmol半乳糖醛酸為1個酶活力單位,。
果膠酶活性（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）÷T= 2x÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計算
酶活定義：在50℃，pH3.5條件下,，每克樣本每小時分解果膠產(chǎn)生1μmol半乳糖醛酸為1個酶活力單位,。
果膠酶活性（U/g 質(zhì)量）= x×V提取÷W÷T=2x÷W
（3）按照細菌數(shù)量計算
酶活定義：在50℃，pH3.5條件下,，每104個細菌每小時分解果膠產(chǎn)生1μmol半乳糖醛酸為1個酶活力單位,。
果膠酶活性（U/104 cell）= x×V提取÷T÷細菌數(shù)量（萬個）=2x÷細菌數(shù)量（萬個）
（4）按液體體積計算
酶活定義：在50℃，pH3.5條件下，每mL樣本每小時分解果膠產(chǎn)生1μmol半乳糖醛酸為1個酶活力單位,。
果膠酶活性（U/mL）= x×V樣÷V樣÷T= 2x
V提?。禾崛∫后w積，1mL,； V樣：加入的樣本體積,，0.125mL；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；T：反應(yīng)時間：0.5h,。
注意事項：
1、 A大于1.5時,，建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定,。
2、 植物果實組織建議將樣本稀釋10倍或20倍后再測定,。
實驗實例：
1. 0.1g獼猴桃加入1mL提取液進行冰浴勻漿,，然后10000g，4℃,，離心10min,，取上清置于冰上稀釋10倍后按照測定步驟操作，測得計算ΔA= A測定管-A對照管=1.465-1.45=0.015,，依據(jù)標(biāo)準曲線y=0.2575x-0.2214,，計
算得x=0.918μmol/mL，按樣本質(zhì)量計算酶活得：
果膠酶活性（U/g質(zhì)量）=2x÷W×10（稀釋倍數(shù)）= 183.6 U/g質(zhì)量,。
相關(guān)發(fā)表文獻：
[1] Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali. Microbial Pathogenesis. October 2018;132-138.(IF2.581)
[2] Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Two members of the velvet family,VmVeA and VmVelB,affect conidiation,virulence and pectinase expression in Valsa mali. Molecular Plant Pathology. November 2017;(IF4.379)
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC3680/BC3685 原果膠含量檢測試劑盒
BC4120/BC4125 可溶性果膠含量檢測試劑盒
BC4150/BC4155 離子結(jié)合型果膠（ISP）含量檢測試劑盒
BC2640/BC2645 果膠裂解酶（PL）活性檢測試劑盒
果膠酶活性檢測試劑盒 糖代謝 果膠酶活性檢測試劑盒 糖代謝
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