多聚半乳糖醛酸酶（PG）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC2660
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：若溶液中有晶體析出,，37℃水浴溶解,；

2. 試劑二：臨用前加入8 mL蒸餾水，60℃水浴助溶,；

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg半乳糖醛酸,。臨用前加入0.943 mL蒸餾水，配成50 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液,。

產(chǎn)品說明：

多聚半乳糖醛酸酶（Ploygalacturonase,，PG）屬果膠酶的一種，廣泛存在于植物,、細(xì)菌及真菌中,。其催化多聚半乳糖醛酸分解，在果實軟化,、花粉授粉,、種子發(fā)育成熟及器官脫落等方面具有重要作用，并且病原菌在侵染宿主植物時,，可分泌多聚半乳糖醛酸酶來降解宿主細(xì)胞壁,，進(jìn)而導(dǎo)致病程發(fā)展。

PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸,，半乳糖醛酸與DNS試劑反應(yīng)生成在540 nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì),，測定540 nm處吸光值變化可計算得果膠酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測,。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、低溫臺式離心機,、水浴鍋,、1 mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器,、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 樣本提取上清液置于冰上待測,，且樣本提取完成后建議當(dāng)天提取當(dāng)天內(nèi)測完,。

2. 當(dāng)A大于1.2時，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定,，并在計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

3. 植物果實組織建議將樣本稀釋10倍或20倍后再測定。

4. 若樣本ΔA值偏小,，建議延長酶促反應(yīng)時間,，并在計算公式中除以相應(yīng)時間。

實驗實例：

1. 取0.1g鮮梨加入1mL提取液冰浴勻漿后于4℃,，16000 g,，離心10 min，取上清稀釋5倍后按照測定步驟操作,，測得計算ΔA=A測定管-A對照管=0.912-0.882=0.03,，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.1127x-0.1207，計算得x=1.337,，按樣本質(zhì)量計算：

PG酶活（U/g質(zhì)量）= 0.5x÷W×5（稀釋倍數(shù)）=33.43 U/g質(zhì)量,。
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