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堿性蛋白酶（AKP）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號(hào)：BC2305
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入4mL蒸餾水,，充分溶解,；2-8℃保存8周。

2. 試劑二：臨用前取1瓶加入4mL提取液,，沸水浴中攪拌溶解,；2-8℃保存8周。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品：20μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)酪/酸,。

產(chǎn)品說明：
AKP是指在堿性條件下催化蛋白質(zhì)肽鍵水解的酶類,，屬于絲*酸蛋白酶。此外,，該酶還能夠水解酯鍵,、酰胺鍵，具有轉(zhuǎn)酯及轉(zhuǎn)肽的功能,。該酶是主要工業(yè)用酶之一,，廣泛應(yīng)用于制藥、絲綢,、食品,、制革等行業(yè)。
在堿性條件下，AKP水解酪蛋白生成酪/酸,；在堿性條件下,，酪/酸還原磷鉬酸生成鎢藍(lán)；鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰,，測定680nm吸光度增加速率,，來計(jì)算AKP活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測,。
需自備的儀器和用品：
研缽/勻漿器、臺(tái)式離心機(jī),、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋,、磁力攪拌器,、可調(diào)式移液槍、1.5 mL EP管和蒸餾水,。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
稱約0.1g組織,，加入1mL提取液,，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心10min,，取上清,，即粗酶液，置冰上待測,。或直接稱取0.1g酶制品,，加入1mL提取液，置冰上待測,。
二,、測定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至680nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 試劑一、試劑二和試劑三置于40℃水浴保溫30min以上,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：臨用前將20μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋80倍至0.25μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液使用,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1. 樣本測定：(1.5mLEP管中分別加入下列試劑)

取200μL于微量玻璃比色皿/96孔板,，于680nm測定光吸收,，分別記為A對(duì)照管,、A測定管,、A空白管、A標(biāo)準(zhǔn)管,。
并計(jì)算ΔA測定=A測定管-A對(duì)照管,、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次

注意事項(xiàng)：
若反應(yīng)較弱,，（A測定管-A對(duì)照管）差值較小，可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間（20-30min）,，即第一步水浴時(shí)間,，最后計(jì)算酶活時(shí)對(duì)公式進(jìn)行修改。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2280/BC2285 酸性蛋白酶（ACP）活性檢測試劑盒
BC2290/BC2295 中性蛋*酶（NP）活性檢測試劑盒

堿性蛋白酶(AKP)活性檢測試劑盒