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土壤游離氨基酸（S-FAA）含量檢測試劑盒說明書

微量法

貨號：BC5095

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1、 試劑四：臨用前取1支加1 mL蒸餾水,，充分溶解,，用不完的試劑-20℃分裝保存2周；（1支粉劑溶解后可做100T,，為了延長使用時間,，此產(chǎn)品多給1支粉劑）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品：10 mg半胱*酸,。臨用前加入4.13 mL蒸餾水,，得到20 μmol/mL的半胱氨*標(biāo)準(zhǔn)溶液備用，用不完的試劑可以2-8℃保存4周,。

產(chǎn)品說明：

作為土壤中一類重要的化合物,，氨基酸占土壤中全氮的15%-60%，是土壤氮素循環(huán)和植物養(yǎng)分供給過程中重要的“庫"和“源",，可通過礦化作用滿足作物氮素營養(yǎng)的需求,，也可以被植物直接吸收利用。另外,，氨基酸也是土壤微生物重要的氮源,，對于土壤微生物群落結(jié)構(gòu),、數(shù)量和活性均有直接影響。因此,，研究土壤中氨基酸含量變化規(guī)律,，對研究土壤氮素循環(huán)，及其對植物生理生態(tài)變化的影響均有重要意義,。

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng)在570nm有特征吸收峰,；通過測定570nm吸光度，來計算氨基酸含量,。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

臺式離心機,、可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板,、可調(diào)式移液槍,、研缽、30-50目篩,、無水乙醇,、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一,、 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）

土樣37℃/自然風(fēng)干后過30-50目篩，稱取約0.15g土樣,，加試劑一1mL，振蕩2h,，10000rpm離心10min,，取上清液，待測,。

二,、測定步驟

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：取60μL 20μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液加入140μL蒸餾水得6μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液進行實驗。

3. 操作表：（在EP管中進行）

混勻后蓋緊瓶蓋（纏封口膜防止水分散失）,，置于沸水浴中保溫15min,，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次，8000rpm離心5min后取上清,，于570nm測定吸光值,，分別記為A測定管,、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管,，并計算ΔA測定管=A測定管-A空白管,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管，顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完,。標(biāo)準(zhǔn)管,、空白管只需做1-2次。

三,、S-FAA含量計算

S-FAA含量（μmol/g 土樣）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）÷（V樣÷V樣總×W）

= 6×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度,，6μmol/mL；V標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,，0.04mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積,，0.04mL；V樣總：樣本總體積,，1mL,。

注意事項：

1、 試劑四均需臨用前配制,，且避光保存,。

2、 脯*酸和羥脯*與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰,，因此,，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

3,、 如果ΔA測定管大于1,，建議將樣本上清液用試劑一稀釋后進行測定。

實驗實例：

1,、 取0.15g土樣加入1mL試劑一進行樣本處理,，取上清后按照測定步驟操作，使用96孔板測得A測定管=0.304,、A標(biāo)準(zhǔn)管=0.603,、A空白管=0.064，計算ΔA測定管=A測定管-A空白管=0.304-0.064=0.240,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管=0.603-0.064=0.539,，按樣本質(zhì)量計算含量得：

S-FAA（μmol/g土樣）=6×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W=6×0.240÷0.539 ÷0.15=17.811 μmol/g 土樣,。

參考文獻：

[1] Wang X, Cui X Y, Guo Y F A study on free amino acid in different forest types soil of cold-temperate forest region[J]. Journal of Nanjing Forestry University (Natural Science Edition), 2016, 59(04): 42-48.

[2] Wang B, Jiang Y Y, Jiao J G, et al. Effects of earthworm on constituent and amount of amino acid in soil[J]. Acta Ecologica Sinica, 2015,35(14):4816-4823.

[3] Zhang X J, Wang W Y, Li W Q, et al. Dynamics of soil dissolved organic nitrogen in alpine meadow[J]. Journal of Lanzhou University: Natural Sciences, 2016, 52(5):623-627.

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