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血清淀*酶（AMY）活性檢測試劑盒（碘-淀粉比色法）說明書

微量法

貨號：BC5055

規(guī)格：100T/48S

產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1,、 試劑一：臨用前加入12.5mL試劑二,，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解,；用不完的試劑2-8℃保存1個月,。

2、 試劑三的配制：將試劑三A倒入試劑三B中,，用蒸餾水定容至10mL,，2-8℃避光保存一個月。

3,、 標準品：10mg淀粉標準品,。臨用前加10mL試劑二，置于常溫水中并加熱至煮沸,，配成1mg/mL淀粉標準液,。用不完的試劑2-8℃保存1個月。

產品說明：

血清淀*酶( Serum amylase,， AMY) 屬于α-淀*酶,，以無規(guī)則方式水解多糖分子內部的α-1,4糖苷鍵，生成寡聚糖,、麥芽糖和葡萄糖的混合物,。AMY主要由唾液腺和胰腺分泌，另外近端十二指腸,、肺,、子宮,、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌,。

AMY催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解，產生葡萄糖,、麥芽糖以及糊精等，碘可以與未被水解的淀粉結合,，生成在570nm下有特征吸收峰的復合物,，其深淺可計算出淀*酶的活力單位。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。

需自備的儀器和用品：

酶標儀/可見分光光度計、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱,、臺式離心機,、可調式移液器、96孔板/微量玻璃比色皿,、研缽/勻漿器、蒸餾水,。

操作步驟：

一、粗酶液提取

取40μL血清和160μL蒸餾水混合（即將血清稀釋5倍）,，分為2管100μL分別作為測定管和對照管,。若實驗后所測數值偏大或者偏小，可以調整稀釋比例（比如數值偏小可以將80μL血清和120μL蒸餾水混合即將血清稀釋2.5倍）

二,、測定步驟和加樣表

分光光度計/酶標儀預熱30min以上,，調節(jié)波長到570 nm，蒸餾水調零,。

將淀粉標準液用蒸餾水稀釋為0.5,、0.4,、0.2,、0.1,、0.05,、0.025,、0.0125、0.00625mg/mL的標準溶液,。

按操作表依次加入各試劑：

混勻后吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中,，于15min內讀取測定管,、對照管,、空白管1,、標準管,、空白管2 在570nm下的吸光度,，分別記為A測定,、A對照、A空白1,、A標準和A空白2,，計算ΔA測定=（A空白1-A空白2）-（A測定-A對照）,，ΔA標準=A標準-A空白2,。

三,、AMY活性計算

1,、 標準曲線的繪制

以ΔA標準為y軸,，以標準溶液濃度為x軸,，繪制標準曲線,，得到方程y=kx+b。將ΔA測定帶入方程得到x（mg/mL）,。

2,、按照血清體積計算：

單位定義：每mL血清每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位,。

AMY活性 (U/mL)= x×V樣÷V樣÷T×F =0.1×x×F

V樣：加入反應體系中樣本體積，0.1mL,；T：反應時間,，10min,；F：稀釋倍數,。

注意事項：

1. ΔA測定大于1.5時,，可以對樣本進行適當稀釋后測定,。

2. 反應完成后需在15min內測定吸光度。

實驗實例：

1,、 取40μL牛血清和160μL蒸餾水混合（即血清稀釋5倍）后,，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定= A空白-（A測定-A對照）=（1.409-0.067）-（1.297-0.058）=0.103,，帶入標準曲線y=2.6047x-0.0165，計算x=0.0459,，按公式計算活性：

AMY（U/mL）= x×V樣÷V樣÷T=0.1×x×F=0.1×x×F =0.0230 U/ mL,。

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