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血清淀*酶（AMY）活性檢測(cè)試劑盒（碘-淀粉比色法）說(shuō)明書(shū)

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)：BC5050

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1,、 試劑一：臨用前加入25mL試劑二,，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解,；用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月,。

2、 試劑三的配制：將試劑三A倒入試劑三B中,，用蒸餾水定容至20mL,，2-8℃避光保存一個(gè)月。

3,、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg淀粉標(biāo)準(zhǔn)品,。臨用前加10mL試劑二,，置于常溫水中并加熱至煮沸，配成1mg/mL淀粉標(biāo)準(zhǔn)液,。用不完的試劑2-8℃保存1個(gè)月,。

產(chǎn)品說(shuō)明：

血清淀*酶( Serum amylase， AMY) 屬于α-淀*酶,，以無(wú)規(guī)則方式水解多糖分子內(nèi)部的α-1,4糖苷鍵,，生成寡聚糖、麥芽糖和葡萄糖的混合物,。AMY主要由唾液腺和胰腺分泌,，另外近端十二指腸、肺,、子宮,、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。

AMY催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解,，產(chǎn)生葡萄糖,、麥芽糖以及糊精等，碘可以與未被水解的淀粉結(jié)合,，生成在570nm下有特征吸收峰的復(fù)合物,，其深淺可計(jì)算出淀*酶的活力單位。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè),。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱,、臺(tái)式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿,、研缽/勻漿器,、蒸餾水。

操作步驟：

一,、 粗酶液提取

取100μL血清和400μL蒸餾水混合（即將血清稀釋5倍）,，分為2管250μL分別作為測(cè)定管和對(duì)照管。若實(shí)驗(yàn)后所測(cè)數(shù)值偏大或者偏小,，可以調(diào)整稀釋比例（比如數(shù)值偏小可以將200μL血清和300μL蒸餾水混合即將血清稀釋2.5倍）

二,、 測(cè)定步驟和加樣表

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至570nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2,、 將淀粉標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為0.5,、0.4、0.2,、0.1,、0.05、0.025,、0.0125,、0.00625mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3,、 按操作表依次加入各試劑：

混勻后于15min內(nèi)測(cè)定570nm處測(cè)定管,、對(duì)照管、空白管1,、標(biāo)準(zhǔn)管,、空白管2的吸光度，分別記為A測(cè)定,、A對(duì)照,、A空白1、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白2,，計(jì)算ΔA測(cè)定=（A空白1-A空白2）-（A測(cè)定-A對(duì)照）,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白2。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),、空白管1,、空白管2做1-2次即可。                            

三,、AMY活性計(jì)算

1,、 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

以ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，得到方程y=kx+b。將ΔA測(cè)定帶入方程得到x（mg/mL）,。

2,、按照血清體積計(jì)算：

單位定義：每mL血清每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個(gè)酶活性單位。

AMY活性 (U/mL)= x×V樣÷V樣÷T×F =0.1×x×F

V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.25 mL,；T：反應(yīng)時(shí)間，10min,；F：稀釋倍數(shù),。

注意事項(xiàng)：

1. ΔA測(cè)定大于1.5時(shí)，可以對(duì)樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后測(cè)定。

2. 反應(yīng)完成后需在15min內(nèi)測(cè)定吸光度,。 

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1,、 取100μL牛血清和400μL蒸餾水混合（即血清稀釋5倍）后，按照測(cè)定步驟操作,，計(jì)算ΔA測(cè)定= （A空白1-A空白2）-（A測(cè)定-A對(duì)照）=（1.137-0.029）-（0.986-0.012）=0.134,，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)y=1.9683x+0.0082，計(jì)算x=0.0639,，按公式計(jì)算活性：

AMY（U/mL）=0.1×x×F =0.1×0.0639×5=0.0320 U/mL,。

相關(guān)系列產(chǎn)品：

BC0700/ BC0705 淀粉含量檢測(cè)試劑盒

BC4260/ BC4265 直鏈淀粉含量檢測(cè)試劑盒

BC4270/ BC4275 支鏈淀粉含量檢測(cè)試劑盒

BC4570/ BC4575 α-淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 (碘-淀粉比色法)

BC4580/ BC4585 β-淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 (碘-淀粉比色法)

血清淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 淀粉 血清淀*酶活性檢測(cè)試劑盒 淀粉