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海藻糖合成酶（TS）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作,。

貨號：BC4950

規(guī)格：50T/24S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1,、 試劑二：臨用取一瓶前先加入7 mL蒸餾水,，震蕩使其充分溶解（若溶解后的試劑中有黑色顆粒物，可離心后取上清使用）,，用不完的試劑2-8℃保存2周,。

2、 工作液的配制：臨用前將試劑三和試劑四1:1等體積混合,，根據(jù)樣本實際所需用量現(xiàn)配現(xiàn)用,。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入1 mL蒸餾水配制成50 μmol/mL的麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,，用不完的試劑2-8℃保存2周,。然后用蒸餾水16倍稀釋成3.125 μmol/mL的麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（建議吸取25μL 50μmol/mL麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入375μL蒸餾水中,，充分混勻）待測,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說明：

海藻糖是功能性低聚糖,，具有非還原性,、保濕性、熱酸穩(wěn)定性、抗凍結(jié)性等特性,，是細胞在不良環(huán)境條件下產(chǎn)生的一種重要的抗逆應(yīng)激物之一,，它對生物大分子和生物組織有著非特異性的保護作用。

海藻糖合成酶（Trehalose Synthase,，TS）能催化麥芽糖生成海藻糖,，是海藻糖生物合成的關(guān)鍵途徑之一。本試劑盒使用糖化酶分解剩余麥芽糖為葡萄糖,，通過葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖含量,，按照麥芽糖減少的量表示海藻糖合成酶的活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿,、低溫離心機,、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器,、蒸餾水。

操作步驟：

一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照每500萬細菌或細胞加入1 mL提取液，超聲波破碎細胞（功率200W,，超聲3s,，間隔9s，重復(fù)30次）,；然后8000 g,，4℃，離心10 min,，取上清（若上清不夠澄清,，建議重復(fù)上述離心步驟），置于冰上待檢,。

組織：按照組織質(zhì)量（g）: 提取液體積（mL）為1 : 5~10 的比例（建議稱取約0.1 g組織,，加入1 mL提取液），進行冰浴勻漿,。8000 g,，4℃，離心10 min，取上清（若上清不夠澄清,，建議重復(fù)上述離心步驟,，置于冰上待檢。

二,、測定步驟

1,、 分光光度計預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至505 nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、 在EP管中進行如下操作：

（1）酶促反應(yīng)

（2）顯色反應(yīng)（在EP管中進行以下操作）

注：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測1~2次,。

三、酶活性計算

1,、按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個酶活力單位,。

TS酶活（U/mg prot）= C標(biāo)×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷（V樣×Cpr）÷T×F÷2

=13.02×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr×F

2、按樣本質(zhì)量計算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個酶活力單位,。

TS酶活（U/g 質(zhì)量）= C標(biāo)×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷（V樣÷V樣總×W）÷T×F÷2

=13.02×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

3,、按細菌或細胞數(shù)量計算：

單位的定義：每10⁴個細菌或細胞每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個酶活力單位。

TS酶活（U/10⁴ cell）= C標(biāo)×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷（V樣÷V樣總×cell）÷T×F÷2

=13.02×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷cell×F

 C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度,，3.125 μmol/mL=3.125×10³ nmol/mL,；V樣總：加入提取液體積，1 mL；V樣：加入樣本體積,，0.1 mL,；T：反應(yīng)時間，120 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g,；cell：細胞或細菌總數(shù)，以萬計,；F：稀釋倍數(shù),； 2：1分子麥芽糖可轉(zhuǎn)化為2分子葡萄糖。

注意事項：

1,、 當(dāng)吸光值大于1.5或者ΔA測定大于1時,，建議將樣本用蒸餾水稀釋后測量。計算公式注意乘以稀釋倍數(shù),。

實驗實例：

1,、 取0.1 g小鼠肝臟加入1 mL提取液進行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作,，用1 mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A對照-A測定=1.471-0.817=0.654,、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.790-0.003=0.787，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

TS酶活（U/g 質(zhì)量）= 13.02×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =216.393 U/g 質(zhì)量,。

2,、 取0.1 g海帶加入1 mL提取液進行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作,，用1 mL玻璃比色皿測得計算ΔA測定=A對照-A測定=1.059-0.629=0.430、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.790-0.003=0.787,，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

TS酶活（U/g 質(zhì)量）=13.02×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =142.277 U/g 質(zhì)量,。

相關(guān)系列產(chǎn)品：

BC0330/BC0335 海藻糖含量檢測試劑盒

BC2510/BC2515 海藻糖酶（THL）活性檢測試劑盒

海藻糖合成酶（TS）活性檢測試劑盒 糖代謝 海藻糖合成酶（TS）活性檢測試劑盒 糖代謝