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ABTS自由基清除能力檢測試劑盒說明書

微量法

貨號：BC4775

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制： 

1,、 試劑二：臨用前加入1 mL蒸餾水,，充分溶解,；用不完的試劑可分裝后保存，-20℃可保存四周,，避免反復凍融,；

2,、 試劑三工作液的配制：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前根據(jù)樣本量按試劑三（μL）：蒸餾水（mL）=1μL:12mL（注意單位）的比例配成試劑三工作液,，現(xiàn)用現(xiàn)配,，用多少配多少，盡量在4h之內(nèi)用完,；

3、 試劑四工作液的配制：可先將試劑四-20℃分裝保存,。臨用前根據(jù)樣本量按試劑四：試劑一（V:V）=1:9的比例配成試劑四工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用,，用不完的試劑放于-20℃可保存兩周,。

4,、 試劑五：粉劑置于試劑瓶內(nèi)玻璃瓶中，含有5 mg維生素C,，臨用前加入2.8 mL提取液,，充分振蕩溶解,；配成10 mmol/L維生素C溶液，用于陽性對照,。2-8℃可保存兩周,。

5,、 ABTS工作液的配制：臨用前根據(jù)試驗所需量按試劑一：試劑二：試劑三工作液（V:V:V）=76:5:4的比例配成ABTS工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配,，室溫避光保存,，務必在30分鐘內(nèi)使用,。

產(chǎn)品說明：

ABTS法可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化能力測定,，是使用廣泛的間接檢測方法。ABTS經(jīng)氧化后生成穩(wěn)定的藍綠色陽離子ABTS自由基,，在405 nm或734 nm處有最大吸收峰,。被測物質(zhì)加入ABTS自由基溶液后，所含抗氧化成分能與ABTS自由基發(fā)生反應而使反應體系褪色,，405 nm的吸光度下降，在一定范圍內(nèi)其吸光度的變化與自由基被清除的程度成正比,。本試劑盒中,，通過測定吸光度下降的程度來反映樣本清除ABTS自由基的能力。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀,、微量玻璃比色皿/96孔板,、恒溫水浴鍋,、臺式離心機、研缽/粉碎機,、烘干箱,、30~50目篩、冰,、蒸餾水。

操作步驟：

一,、 樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）

1、植物組織樣本的制備：將新鮮樣本置于60℃烘箱烘干至恒重,，研缽研碎（或粉碎機粉碎），過30~50目篩,；稱取約0.05 g樣本，加入1 mL提取液后置于40℃水浴鍋中浸提30 min；10000 rpm 室溫離心10 min,，取上清，置于冰上待測,。

2、紅酒,、果汁等液體樣本：吸取100 μL樣本溶液加入900 μL提取液,，旋渦振蕩混勻，室溫10000 rpm 離心10 min,，取上清，置冰上待測,。

3,、提取物或者藥物：可用提取液配制成一定濃度,，如5 mg/mL。

注意：不同樣本清除ABTS自由基的能力可能相差很大,，為保證實驗結果的準確性,，樣本要根據(jù)預實驗結果進行適當調(diào)整（如清除率大于90%,，建議將提取的樣本用提取液進行稀釋；清除率小于5%,，建議加大烘干樣本質(zhì)量或液體樣本體積進行提取）,。

二,、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min以上,，調(diào)節(jié)波長至405 nm，分光光度計用蒸餾水調(diào)零,。

2. 陽性對照的準備：若需要線性關系，建議將10 mmol/L的維生素C溶液用提取液配制成0.4,、0.2,、0.1、0.05,、0.025、0.0125 mmol/L的維生素C溶液待用,，稀釋可參考下表；若需要清除率約為90%的陽性對照,，則建議將10 mmol/L維生素C溶液用提取液配制成大于0.5 mmol/L的維生素C溶液待用,。

備注：實驗中每個陽性對照管需10µL維生素C溶液,。

3. 操作表：在96孔板或EP管中分別加入下列試劑：

三、ABTS自由基清除率的計算

1.  陽性對照的自由基清除率計算公式：

ABTS自由基清除率D_VC% =[(A空白-A陽性對照)÷A空白]×100%,。

2.  樣本的自由基清除率計算公式：

ABTS自由基清除率D% =[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白×100%,。

注意事項：

1、不同樣本清除ABTS自由基的能力可能相差很大,，如果要比較不同樣本的ABTS自由基清除能力,，建議對于同一批樣本加入等量的樣本，紅酒,、組織勻漿,、果汁等液體樣本加入同樣體積，提取物（或者藥物）配制成同樣濃度,。在比較時,，將樣本根據(jù)預實驗結果進行適當調(diào)整,，比較同樣濃度（相同稀釋倍數(shù)）的清除率大小。

2,、樣本建議當天提取當天檢測。

實驗實例：

1,、 取0.0502 g菠菜葉片加入1 mL提取液進行勻漿研磨,，離心取上清后按照測定步驟操作，使用96孔板測定吸光值,，計算清除率得：

D% =[A空白-(A測定-A對照)]÷A空白×100% =[0.69-(0.231-0.217)]÷0.69×100%=97.97%,。

2,、 取0.2 mmol/L VC陽性對照管按照測定步驟操作，使用96孔板測定吸光值,，計算清除率得：

D_VC% =[(A空白-A陽性對照)÷A空白]×100% =[0.69-0.428]÷0.69×100%=37.97%。

相關系列產(chǎn)品：

BC4750/BC4755 DPPH自由基清除能力檢測試劑盒

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