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血清銅離子（Cu）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

可見(jiàn)分光光度法

貨號(hào)：BC5640

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1. 試劑一：若有試劑析出，置于37℃水浴溶解即可,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：10mmol/L（即10000µmol/L）硫酸銅標(biāo)準(zhǔn)液,。

產(chǎn)品說(shuō)明：

銅是人體必需的微量元素之一，是許多酶的重要組成成分,，它可以和蛋白質(zhì)結(jié)合形成銅蛋白,，具有保護(hù)細(xì)胞的功能；血漿中的銅大部分與球蛋白結(jié)合形成銅藍(lán)蛋白,，對(duì)紅細(xì)胞的生成具有重要作用,。因此，測(cè)定血清銅可知體內(nèi)是否缺銅,。

在酸性條件下,，Cu²⁺從銅藍(lán)蛋白和清蛋白中解離出來(lái)，與絡(luò)合劑3,5-二溴-PAESA反應(yīng),，產(chǎn)生紫色絡(luò)合物,，在580nm處有特征吸收峰,，在一定范圍內(nèi)吸光度與濃度成正比，從而計(jì)算出Cu²⁺濃度,。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì),、低溫離心機(jī),、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿,、可調(diào)式移液槍,、冰和蒸餾水,。

操作步驟：

一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

血漿/血清：直接測(cè)定,。若有渾濁請(qǐng)離心后取上清置于冰上待測(cè),。（注意：血漿樣本不能用EDTA作為抗凝劑，建議使用肝素作為抗凝劑）,。

二,、測(cè)定步驟

1、 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至580nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、 80µmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：取100µL 10mmol/L的標(biāo)準(zhǔn)液加入400μL 蒸餾水混勻,，即2000µmol/L的標(biāo)準(zhǔn)品；再取40μL 2000µmol/L的標(biāo)準(zhǔn)品和960μL 蒸餾水混合,，即配成80µmol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

3、 實(shí)驗(yàn)前根據(jù)樣本量取部分試劑一37℃預(yù)熱10min,。

4,、 操作表：（在1.5mLEP管中依次加入以下試劑）

三,、血清銅離子（Cu）含量的計(jì)算

血清銅離子（Cu）含量（μmol/L）=ΔA測(cè)定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）=80×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)

C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度,，80µmol/L。

注意事項(xiàng)：

1. 37℃孵育5min后請(qǐng)立即測(cè)定吸光度,，若樣本數(shù)量過(guò)多,，可分批次測(cè)定，盡量確保在20min內(nèi)完成測(cè)定,。

2. 如果樣本測(cè)定吸光值大于0.5,，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進(jìn)行測(cè)定，注意同步修改計(jì)算公式,。

3. 如果樣本測(cè)定吸光值小于0.005或接近空白管吸光值,，可適當(dāng)增大樣本量，空白管和標(biāo)準(zhǔn)管也需要進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整,。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取馬血清50μL,，按照測(cè)定步驟操作，使用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.125-0.071= 0.054,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.384-0.071=0.313,，計(jì)算含量得：

血清銅離子含量（μmol/L）=80×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=13.802μmol/L。

2. 取人血清50μL,，按照測(cè)定步驟操作,，使用1mL玻璃比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A空白=0.169-0.071= 0.098，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.384-0.071=0.313,，計(jì)算含量得：

血清銅離子含量（μmol/L）=80×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=25.048μmol/L,。

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