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血清銅離子（Cu）含量檢測試劑盒說明書

微量法

貨號：BC5645

規(guī)格：100T/96S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1. 試劑一：若有試劑析出,，置于37℃水浴溶解即可。

2. 標準品：10mmol/L（即10000µmol/L）硫酸銅標準液,。

產品說明：

銅是人體必需的微量元素之一，是許多酶的重要組成成分,，它可以和蛋白質結合形成銅蛋白,，具有保護細胞的功能；血漿中的銅大部分與球蛋白結合形成銅藍蛋白,，對紅細胞的生成具有重要作用,。因此,，測定血清銅可知體內是否缺銅。

在酸性條件下,，Cu²⁺從銅藍蛋白和清蛋白中解離出來,，與絡合劑3,5-二溴-PAESA反應，產生紫色絡合物,，在580nm處有特征吸收峰,，在一定范圍內吸光度與濃度成正比，從而計算出Cu²⁺濃度,。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀,、低溫離心機,、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板,、可調式移液槍,、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一,、樣本處理（可適當調整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）

血漿/血清：直接測定。若有渾濁請離心后取上清置于冰上待測,。（注意：血漿樣本不能用EDTA作為抗凝劑,，建議使用肝素作為抗凝劑）。

二,、測定步驟

1,、 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至580nm,，分光光度計用蒸餾水調零,。

2、 80µmol/L標準溶液配制：取100µL 10mmol/L的標準液加入400μL 蒸餾水混勻,，即2000µmol/L的標準品,；再取40μL 2000µmol/L的標準品和960μL 蒸餾水混合，即配成80µmol/L標準溶液,。

3,、 實驗前根據(jù)樣本量取部分試劑一37℃預熱10min。

4,、 操作表：（在1.5mLEP管或96孔板中加入下列試劑）

三,、血清銅離子（Cu）含量的計算

血清銅離子（Cu）含量（μmol/L）=ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）=80×ΔA測定÷ΔA標準

C標準：標準品濃度，80µmol/L,。

注意事項：

1. 37℃孵育5min后請立即測定吸光度,，若樣本數(shù)量過多，可分批次測定,，盡量確保在20min內完成測定,。

2. 如果樣本測定吸光值大于0.5，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進行測定,，注意同步修改計算公式,。

3. 如果樣本測定吸光值小于0.005或接近空白管吸光值，可適當增大樣本量,，空白管和標準管也需要進行相應調整,。

實驗實例：

1. 取馬血清10μL，按照測定步驟操作,，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.129-0.089=0.040，ΔA標準=A標準-A空白=0.283-0.089=0.194,，計算含量得：

血清銅離子含量（μmol/L）=80×ΔA測定÷ΔA標準=16.495μmol/L,。

2. 取人血清10μL，按照測定步驟操作,，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.160-0.089=0.071,，ΔA標準=A標準-A空白=0.283-0.089=0.194，計算含量得：

血清銅離子含量（μmol/L）=80×ΔA測定÷ΔA標準=29.278μmol/L,。

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