目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>土壤系列>> BC5720-50T/24S土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC5675 | 應用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 組胺含量檢測 |
土壤酸性木聚糖酶（S-ACX）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC5720
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。
溶液的配制：
1,、 標準品稀釋液的配制：臨用前按緩沖液：試劑一=4.8mL：2.4mL（7.2mL，約一條標曲稀釋用量）的比例進行配制,，現(xiàn)配現(xiàn)用,。
2、 標準品：10mg木糖,。臨用前加入667μL標準品稀釋液配制成100μmol/mL的木糖標準液,，2-8℃保存8周。
產(chǎn)品說明：
土壤酸性木聚糖酶（Soil acid xylanase, S-ACX）,，又稱為土壤酸性半纖維素酶,，主要分離自最適生長pH為4-5的微生物。
在酸性環(huán)境中,，S-ACX催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖,，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰,，反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比,，通過測定反應液在540nm吸光值增加速率,，可計算S-ACX活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL玻璃比色皿,、天平、低溫離心機,、水浴鍋,、研缽、30~50目篩,、蒸餾水,。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干,，過30~50目篩。
二,、測定步驟
1,、 可見分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm,，用蒸餾水調(diào)零,。
2、 標準品的稀釋：臨用前將標準品用標準品稀釋液稀釋為1.5,、1.2,、1、0.8,、0.6,、0.4μmol/mL的標準溶液待測。
3,、 標準品稀釋表：
稀釋前濃度（μmol/mL） | 標準品體積（μL） | 稀釋液體積（μL） | 稀釋后濃度（μmol/mL） | |
1 | 100 | 100 | 900 | 10 |
2 | 10 | 150 | 850 | 1.5 |
3 | 10 | 120 | 880 | 1.2 |
4 | 10 | 150 | 1350 | 1 |
5 | 1 | 400 | 100 | 0.8 |
6 | 1 | 300 | 200 | 0.6 |
7 | 1 | 200 | 300 | 0.4 |
備注：實驗中每管需要300μL,。
4、 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 對照管 | 測定管 | 空白管 | 標準管 |
樣本 | 0.1g | 0.1g | - | - |
緩沖液 | 400 | 400 | - | - |
試劑一 | - | 200 | - | - |
渦旋混勻,，置于50℃水浴鍋中反應2h,，立即沸水浴中10min滅活。（注意不要讓蓋子爆開,，以免進水,，改變了反應體系），冷卻至室溫,。 | - | - | ||
試劑一 | 200 | - | - | - |
常溫,，12000g離心10min,，取上清 | - | - | ||
上清液 | 300 | 300 | - | - |
標準品稀釋液 | - | - | 300 | |
標準品 | - | - | - | 300 |
試劑二 | 200 | 200 | 200 | 200 |
渦旋混勻，沸水浴中準確顯色5min（注意不要讓蓋子爆開,，以免進水改變了反應體系）,，冷卻至室溫。 | ||||
蒸餾水 | 500 | 500 | 500 | 500 |
充分混勻后,，室溫12000g離心5min,，取上清液于1mL玻璃比色皿中測定540nm下的吸光度，分別記為A對照,、A測定,、A空白、A標準,。計算ΔA測定=A測定-A對照,，ΔA標準=A標準-A空白?？瞻坠芎蜆藴是€只需測1-2次,。每個測定管需設(shè)一個對照管。 | ||||
三,、S-ACX計算公式
1. 標準曲線的繪制：
根據(jù)標準管的濃度（x,，μmol/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準）,，建立標準曲線,。根據(jù)標準曲線，將ΔA測定（y,，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x,，μmol/mL）。
2. 土壤S-ACX活性計算：
酶活定義：50℃,，pH 4.8條件下,，每克土壤每小時分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活性單位。
S-ACX活性（U/g 土樣）=x× V反總÷W÷T×F=0.3×x÷W×F
V反總：反應體系總體積,，0.6mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；T：反應時間,，2h；F：稀釋倍數(shù),。
注意事項：
1. 若樣本ΔA<0.01,，可適當增大樣本量或者延長50℃反應時間后測定；若樣本ΔA>1.5或者A測定＞1.5時,，可用蒸餾水稀釋上清液后測定,，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù),。
2. 建議使用螺旋管，防止沸水浴過程中蓋子爆開,，改變反應體系,。
實驗實例：
1、 取0.1g森林土樣,，按操作表進行第一步反應2h后,，取上清液用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.302-0.049=0.253,，帶入標曲y=0.5374x-0.1048 （R2=0.9977）,，計算x=0.666，按樣本質(zhì)量計算S-ACX活性得：
S-ACX活性（U/g 土樣）= 0.3×x÷W×F =3.996 U/g 土樣,。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC5730/BC5735 土壤中性木聚糖酶（S-NEX）活性檢測試劑盒
BC5740/BC5745 土壤堿性木聚糖酶（S-BAX）活性檢測試劑盒
土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒 土壤酸性木聚糖酶活性檢測試劑盒
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