目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>蛋白含量測定系列>> BC5820-50T/48S白蛋白含量檢測試劑盒
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
貨號 | BC5820 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 白蛋白含量檢測 |
白蛋白含量檢測試劑盒(溴甲酚紫顯色法)說明書
可見分光光度法
貨號:BC5820
規(guī)格:50T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體0.24 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 2-8℃保存 | |
試劑三 | 液體0.8 mL×1支 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制:
1,、 顯色液:臨用前根據(jù)樣本數(shù)量按照試劑一:試劑二:試劑三=10μL: 3990μL :40μL(4040μL,4T)的比例配制顯色液,,充分混勻,,現(xiàn)配現(xiàn)用;
2,、 標(biāo)準(zhǔn)品:10mg/mL白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液,。臨用前取50μL10mg/mL白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液,加入150μL提取液,,配制成2.5mg/mL白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液,,現(xiàn)配現(xiàn)用。
產(chǎn)品說明:
白蛋白是人體血漿中最主要的蛋白質(zhì),,由肝臟合成,,是人體內(nèi)一種重要的營養(yǎng)物質(zhì),可以維持血漿滲透壓,,并可與多種營養(yǎng)物質(zhì),、激素和藥物相結(jié)合。白蛋白含量可以反映機(jī)體營養(yǎng)狀態(tài),,也可排查影響肝臟代謝功能的疾病,如肝硬化,、肝損傷,、營養(yǎng)不良、惡性腫瘤等,。
在酸性環(huán)境下,,白蛋白分子帶正電荷,與帶負(fù)電荷的溴甲酚紫(Bromocresol Purple,,BCP)結(jié)合生成綠色復(fù)合物,,在603nm處有特定吸收峰,該復(fù)合物吸光值與白蛋白濃度成正比,。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計,、低溫離心機(jī),、分析天平、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀,、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一,、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,,具體比例可以參考文獻(xiàn))
1. 組織樣本:按質(zhì)量(g): 提取液體積(mL)1 : 5~10比例加入提取液(建議稱取0.1g樣本,加入1.0mL提取液),,冰浴勻漿后,,于4℃,8000g,,離心10min,,棄沉淀,取上清液置于冰上待測,。
2. 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(106):提取液體積(mL)5~10: 1的比例加入提取液(建議5百萬細(xì)菌/細(xì)胞加入1.0mL提取液),,冰浴超聲破碎細(xì)菌/細(xì)胞(功率200W,超聲3s,,間隔7s,,總時間5min),然后于4℃,,8000g,,離心10min,棄沉淀,,取上清液置于冰上待測,。
3. 液體樣本:直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定,。
二,、測定步驟
1.可見分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至603nm,,蒸餾水調(diào)零。
2.操作表:(1mL玻璃比色皿中加入下列試劑)
試劑名稱(μL) | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本 | 100 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | 100 | - |
提取液 | - | - | 100 |
顯色液 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻,常溫靜置1min,,于603nm處測定各管吸光值,,分別記為A測定、A標(biāo)準(zhǔn)和A空白,,計算ΔA測定=A測定-A空白,,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白,??瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次,。 注意:靜置時間長短會影響檢測結(jié)果,建議直接在1mL玻璃比色皿中直接反應(yīng)1min,,測定吸光值,。 |
三、白蛋白含量計算
1. 按樣本蛋白濃度計算
白蛋白含量(mg/mg prot)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(V樣×Cpr)=2.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr
2. 按樣本質(zhì)量計算
白蛋白含量(mg/g 質(zhì)量)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(W×V樣÷V樣總)=2.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
3. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計算
白蛋白含量(mg/106 cell)=ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷(V樣×N÷V樣總)=2.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N
4. 按液體體積計算
白蛋白含量(mg/mL)= ΔA測定×(C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn))×V樣÷V樣= 2.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)
C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,,2.5mg/mL,;V樣:加入樣本體積,0.1mL,;V樣總:加入提取液體積,,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,g,;N:細(xì)菌/細(xì)胞總數(shù),,以106計。
注意事項:
1,、 如果?A測定小于0.005或測定管吸光值接近空白管,,可以增加樣本量后再進(jìn)行測定;如果?A測定大于0.5,,建議將樣本上清用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定,。注意同步修改計算公式。
2,、 如果樣本加入顯色劑后出現(xiàn)渾濁,,建議將樣本上清用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式,。
實驗實例:
1. 取100μL人血清樣本,用提取液稀釋10倍,,按照測定步驟操作,,用1mL玻璃比色皿測得計算:ΔA測定=A測定-A空白=0.524-0.121= 0.403,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.387-0.121=0.266,,按液體體積計算得:
白蛋白含量(mg/mL)=2.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×10 =37.876 mg/mL,。
參考文獻(xiàn):
[1] Tada S, Yasukawa K, Yatomi Y, et al. A simple colorimetric assay to determine the concentration and proportion of human mercaptalbumin[J]. Practical Laboratory Medicine, 2022, 31: e00281.
[2] Muramoto Y , Matsushita M , Irino T .Reduction of reaction differences between human mercaptalbumin and human nonmercaptalbumin measured by the bromcresol purple method[J].Clinica Chimica Acta, 1999, 289(1-2):69-78.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC1270/BC1275 蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒
BC3180/BC3185 雙縮脲法蛋白含量檢測試劑盒
白蛋白含量檢測試劑盒
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