日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

蛋白質(zhì)總巰基含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC5800

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1,、 提取液配制：臨用前根據(jù)樣本量按照提取液一：提取液二=1mL：1 mL進行配制，現(xiàn)配現(xiàn)用,，請勿一次性全部混合,。

2、 若試劑二有析出,，可置于37℃水浴加熱至澄清透明后使用,。

3,、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg還原型谷*甘肽（GSH）。臨用前加入1.3mL蒸餾水配制成25μmol/mL,，2-8℃保存4周,。

4、 0.125μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品配制：取50μL 25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品,，加入950μL蒸餾水,，充分混勻，配制成1.25μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品,；然后取100μL 1.25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)品,，加入900μL蒸餾水，充分混勻,，配制成0.125μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品使用,，現(xiàn)配現(xiàn)用。

產(chǎn)品說明：

巰基的存在使得蛋白質(zhì)能夠進行二硫鍵的形成,，從而維持分子的穩(wěn)定性和功能性,。巰基還參與到氧化還原反應(yīng)中，具有重要的生物學(xué)作用,。在細(xì)胞內(nèi),，巰基含量的變化與多種疾病的發(fā)生和進展密切相關(guān)，因此巰基也成為了生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要研究對象,。本試劑盒測定的是蛋白質(zhì)二硫鍵斷裂產(chǎn)生的巰基和本身游離巰基的總和,。

還原劑會使二硫鍵裂解生成巰基，巰基會發(fā)生親核反應(yīng),，即巰基與5,5’-二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng),，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰,，據(jù)此可以計算蛋白質(zhì)總巰基含量,。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計,、1mL玻璃比色皿、低溫離心機,、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀,、丙酮（AR）、蒸餾水,。

操作步驟

一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液,，冰浴勻漿后于4℃,，3000rpm 離心10min，棄上清,。在沉淀中加入2mL試劑一,，攪勻后溶解沉淀，沉淀溶解液作為樣本進行實驗,。（注：（1）植物葉片等纖維含量較高的樣本,，溶解沉淀后4℃ 3000rpm離心3min，取上清作為樣本進行實驗,,；（2）加入試劑一后會有大量氣泡產(chǎn)生,，請緩慢加入,，建議使用5mL的EP管）,。

2. 細(xì)菌/細(xì)胞：按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10⁶個）：提取液體積（mL）為5~10：1的比例（建議5百萬細(xì)菌/細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎（功率200W,，超聲3秒,，間隔10秒，總時間3min）后,，于4℃,，3000rpm 離心10min，棄上清,。在沉淀中加入2mL試劑一,，攪勻后溶解沉淀，沉淀溶解液作為樣本進行實驗,。（注：（1）若沉淀溶解不全,，可4℃ 3000rpm離心3min，取上清作為樣本進行實驗,；（2）加入試劑一后會有大量氣泡產(chǎn)生,，請緩慢加入，建議使用5mL的EP管）,。

3. 血清/血漿,、牛奶等液體：取100μL液體樣本加入0.9mL丙酮，4℃,，3000rpm 離心10min,，棄上清。在沉淀中加入2mL試劑一,，攪勻后溶解沉淀,，沉淀溶解液作為樣本進行實驗。（注：若測定數(shù)值偏小,，可改變樣本與丙酮的比例,，如取0.2mL液體樣本加入0.8mL丙酮或0.3mL液體樣本加入0.7mL丙酮,，注意同步修改計算公式）。

二,、測定步驟

1,、 可見分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm,。蒸餾水調(diào)零,。

2、 操作表：（建議在5mL的EP管中操作）

三,、蛋白質(zhì)總巰基含量的計算

1. 按照樣本蛋白濃度計算

蛋白質(zhì)總巰基含量（μmol/mg prot）=ΔA測定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V樣本÷（V樣本×Cpr）×F

=0.125× ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×Cpr×F

2. 按照樣本質(zhì)量計算

蛋白質(zhì)總巰基含量（μmol/g 質(zhì)量）=ΔA測定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V試劑一÷W×F

=0.25×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

3. 按照液體體積計算

蛋白質(zhì)總巰基含量（μmol/mL）=ΔA測定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V試劑一÷V液樣×F =2.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×F

4. 按照細(xì)胞/細(xì)菌數(shù)量計算：

蛋白質(zhì)總巰基含量（μmol/10⁶ cell）=ΔA測定÷（ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)準(zhǔn)）×V試劑一÷N÷2×F=0.25×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷N×F

C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.125μmol/mL,；V樣本：加入的樣本體積,，0.3mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,，蛋白濃度需自行測定，推薦使用BCA方法測定,；W：樣本質(zhì)量,，g；V試劑一：提取時加入試劑一體積，2mL,；V液樣：提取時加入的樣本體積,，0.1mL；F：稀釋倍數(shù),；N：細(xì)胞/細(xì)菌總數(shù),，以10⁶計。

注意事項：

1. 若樣本ΔA測定<0.01,，可適當(dāng)增大樣本量后測定,，注意同步修改空白管和標(biāo)準(zhǔn)管及計算公式；若樣本ΔA測定>1.5,，可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測定,，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù)。

實驗實例：

1,、 取100μL馬血清,，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.557-0.038=0.519,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557,，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)總巰基含量得：

蛋白質(zhì)總巰基含量（μmol/mL）= 2.5×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)=2.329μmol/mL。

2,、 取0.1036g鼠肝，按照測定步驟操作,，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=0.727-0.111=0.616,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)總巰基含量得：

蛋白質(zhì)總巰基含量（μmol/g 質(zhì)量）= 0.25×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =2.669μmol/g 質(zhì)量,。

3,、 取0.1078g黃豆粉，沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后,，按照測定步驟操作,，用1mL玻璃比色皿測得ΔA測定=A測定-A對照=1.080-0.068=1.012，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=0.633-0.076=0.557,，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)總巰基含量得：

蛋白質(zhì)總巰基含量（μmol/g 質(zhì)量）=0.25×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F =8.427μmol/g 質(zhì)量,。

相關(guān)系列產(chǎn)品：

BC1370/BC1375  總巰基含量檢測試劑盒

BC1430/BC1435  非蛋白巰基含量檢測試劑盒

BC5800/BC5805  蛋白質(zhì)二硫鍵含量檢測試劑盒
BC5890/BC5895  蛋白質(zhì)游離巰基含量檢測試劑

蛋白質(zhì)總巰基含量檢測試劑盒 抗氧化 蛋白質(zhì)總巰基含量檢測試劑盒 抗氧化