目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>糖代謝系列>> BC5810-50T/48S尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活測試盒糖代謝
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC5810 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UDPGT）活性檢測 |
尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（UDPGT）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
貨號：BC5810
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體30 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體2.4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體2.5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體2.4 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑六 | 液體25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 試劑五：臨用前加入1.238mL蒸餾水,，-20℃分裝可保存4周，避免反復(fù)凍融,；
2. 工作液：臨用前根據(jù)樣本量按照試劑二：試劑三：試劑四=80μL：80μL：80μL（0.24mL,，2T）的比例配制，現(xiàn)用現(xiàn)配,；
3. 標準品：5μmol/mL的對硝基 苯 *溶液,。臨用前取50μL 5μmol/mL對硝基 苯 * 溶液，加入950μL蒸餾水,，配制成0.25μmol/mL對硝基 苯 *溶液,，現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說明：
尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶（glucuronosyltransferase,，UDPGT/UGT,，EC 2.4.1.17）是一種結(jié)合在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的膜蛋白，該酶催化葡萄糖醛酸基團從供體尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移至受體上,，受體包括酚類,、醇類、胺類和脂肪酸類。葡萄糖醛酸化代謝促進了藥物和其他外源物質(zhì)通過腎臟或膽汁的排泄,，在生物體內(nèi)代謝,、解毒、清除過程中發(fā)揮重要作用,。
UDPGT催化供體尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的葡萄糖醛酸基團轉(zhuǎn)移至對硝基 苯 *,，后者在405nm處有特征吸收峰，通過測定吸光值降低速率可計算UDPGT活性,。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計,、低溫離心機,、分析天平、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱,、1mL玻璃比色皿,、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器,、冰和蒸餾水,。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）
1. 稱取0.1g樣本,，加入1.0 mL提取液，用勻漿器或研缽于冰上勻漿,；
2. 4℃，800g離心10 min,，棄沉淀,，留上清液，4℃,，9000 g離心20 min,，棄沉淀，留上清液,；
3. 4℃,，12000g離心60 min，棄上清,，留沉淀,。沉淀中加入0.5 mL提取液重懸，置于冰上待測,。
二,、 測定步驟
1．可見分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至405nm，蒸餾水調(diào)零,；
2．將試劑一37℃預(yù)熱15min,；
3．操作表（在EP管中加入下列試劑）：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 空白管 | 標準管 |
樣本 | 200 | 200 | - | - |
蒸餾水 | - | - | 200 | - |
標準品 | - | - | - | 200 |
試劑一 | 440 | 480 | 600 | 600 |
工作液 | 120 | 120 | - | - |
試劑五 | 40 | - | - | - |
混勻，37℃反應(yīng)10min,。 | ||||
試劑六 | 400 | 400 | 400 | 400 |
混勻,，于4℃，8000g離心10min,，取上清液1mL于1mL玻璃比色皿,，測定405nm處吸光值，分別記為A測定,、A對照,、A空白和A標準，計算ΔA測定=A對照-A測定,，ΔA標準=A標準-A空白,。空白管和標準管只需測1-2次,。 | ||||
三,、UDPGT活性計算
1. 按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每min催化消耗1nmol對硝基 苯*定義為一個酶活單位。
UDPGT活性（U/mg prot）=（ΔA測定÷ΔA標準×C標準）×V樣÷（Cpr×V樣）×103÷T
=25×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr
2. 按樣本質(zhì)量計算
單位的定義：每g組織每min催化消耗1nmol對硝基 苯*定義為一個酶活單位,。
UDPGT活性（U/g 質(zhì)量）=（ΔA測定÷ΔA標準×C標準）×V樣÷（W×V樣÷V樣總）×103÷T
=12.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W
C標準：0.25μmol/mL,；V樣：反應(yīng)體系中加入的樣本體積，0.2mL,；V樣總：重懸沉淀加入提取液的體積,，0.5mL；Cpr：蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；103：單位換算系數(shù),，1μmol=103nmol；T：反應(yīng)時間,，10min,。
注意事項：
1. 如果?A測定小于0.004或測定管吸光值接近對照管，可以增加樣本量或者延長37℃反應(yīng)時間后再進行測定,；如果?A測定大于0.9,，建議將重懸液用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式,。
實驗實例：
1. 取0.1027g新鮮小鼠肝臟樣本,，加入1mL提取液進行冰浴勻漿，多次離心后加入0.5mL提取液重懸沉淀，按照測定步驟操作,，用玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A對照-A測定=1.473-0.843=0.630,，ΔA標準=A標準-A空白=0.741- 0.005=0.736，按樣本質(zhì)量計算得：
UDPGT活性（U/g 質(zhì)量）=12.5×ΔA測定÷ΔA標準÷W =104.184 U/g 質(zhì)量
參考文獻：
[1] Visser TJ, Kaptein E, van Raaij JA. et al. Multiple UDP-glucuronyltransferases for the glucuronidation of thyroid hormone with preference for 3,3',5'-triiodothyronine (reverse T3) [J]. Federation of European Biochemical Societies Letters, 1993, 315(1): 65-68.
[2] Viollon-Abadie C, Lassere D, Debruyne E. et al. Phen obarbit al, beta-naphthoflavone, clofibrate, and pregnenolone- 16alpha-carbonitrile do not affect hepatic thyroid hormone UDP-glucuronosyl transferase activity, and thyroid gland function in mice [J]. Toxicology and Applied Pharmacology, 1999, 155(1): 1-12.
[3] Nicod L, Rodriguez S, Letang JM. et al. Antioxidant status, lipid peroxidation, mixed function oxidase and UDP-glucuronyl transferase activities in livers from control and DOCA-salt hypertensive male Sprague Dawley rats [J]. Molecular and Cellular Biochemistry, 2000, 203(1-2): 33-39.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC5170/BC5175 直接膽*素（DBIL）含量檢測試劑盒
BC5180/BC5185 總膽*素（TBIL）含量檢測試劑盒
尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活測試盒糖代謝 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活測試盒糖代謝
16
化工儀器網(wǎng)