羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 誰家是
貨號(hào)：CA1610
規(guī)格：300T
英文名稱 : TRITC Phalloidin 
別名 : 羅丹明鬼筆環(huán)肽 
分子式 : C60H70N12O13S2 
分子量 : 1231.4 
外觀（性狀） : 紫色粉末（凍干粉） 
單位 : 瓶

溶解性（Solubility）:溶于DMSO、DMF,、甲醇或者乙腈水溶液（20%）
多肽序列（Sequence）:TRITC-bicyclic(Ala-DThr-Cys-cis-4-hydroxy-Pro-Ala-2-mercapto-Trp-4-hydroxy-5-amino-Leu)(S-3 to 6)

背景描述
    鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是一種來源于毒蕈類鬼筆鵝膏（Amanita phalloides）的環(huán)狀七肽毒素,，以高親和力（Kd= 20 nM）選擇性結(jié)合于絲狀肌動(dòng)蛋白F-actin，而不會(huì)與單體肌動(dòng)蛋白G-actin結(jié)合,，通常用來標(biāo)記組織切片,，細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞體系中的F-actin，從而對(duì)F-actin進(jìn)行定性和定量分析,。另外,，鬼筆環(huán)肽衍生物也以相近的親和力結(jié)合于大小纖維，無論是動(dòng)植物來源的肌肉細(xì)胞或非肌肉細(xì)胞,，按照每一個(gè)肌動(dòng)蛋白亞基約與一個(gè)鬼筆環(huán)肽分子的計(jì)量比結(jié)合,。且非特異性結(jié)合幾乎可忽略，染色區(qū)域和非染色區(qū)域辨識(shí)度非常明顯,。因此,，鬼筆環(huán)肽衍生物特別適合替代肌動(dòng)蛋白（Actin）抗體進(jìn)行相關(guān)研究。另外鬼筆環(huán)肽衍生物很小，直徑約12-15?,，分子量＜2000 Daltons,，未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白（Actin）的許多生理特性都得以維持，比如,，同肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白如肌球蛋白,，原肌球蛋白，DNase I等仍能發(fā)生反應(yīng),；鬼筆環(huán)肽標(biāo)記的纖維絲仍可穿透固相肌球蛋白基質(zhì),；以及甘油抽提的肌纖維標(biāo)記后仍可收縮等。

    鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結(jié)合阻止絲狀肌動(dòng)蛋白（微絲）的解離,，穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu),，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動(dòng)態(tài)平衡。此特性使得肌動(dòng)蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降＜1μg/mL,，因此,，可用作一種聚合促進(jìn)劑。此外,，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性,。

    本品為TRITC（四甲基異硫氰酸羅丹明）標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽，染色反應(yīng)特異性強(qiáng),，對(duì)比性高,，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測(cè),。另外,，經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。且本品的結(jié)合沒有物種差異性,，適用性廣泛,。

    我司提供儲(chǔ)存液形式（貨號(hào)：CA1610，濃度為20μM）的TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽,，用戶根據(jù)自身需求選擇,。建議使用濃度為80~200nM。

運(yùn)輸與保存方法

    冰袋運(yùn)輸,。-20℃避光干燥保存,， 1年有效。

注意事項(xiàng)

1）鬼筆環(huán)肽具有毒性,，需小心操作（對(duì)人的半數(shù)致死劑量LD50約2mg/kg）,。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

需要自備材料

1）（可選）甲醇
2）1×PBS緩沖液, pH 7.4, 細(xì)胞培養(yǎng)（貨號(hào)：P1020）
3）固定液4%多聚甲醛（溶于PBS緩沖液）（貨號(hào)：P1110）
4）丙酮或透化液0.5% Triton X-100（溶于PBS緩沖液）
5）Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（不含DAPI）,，DAPI
6）（可選）DAPI Fluoromount-GTM 水溶性封片劑（含DAPI）
7）（可選）BSA,，標(biāo)準(zhǔn)
8）載玻片和蓋玻片
9）蓋玻片周圍密封液（如透明指甲油）
10）組裝有TRITC激發(fā)/發(fā)射濾片，以及DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片的熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡

操作步驟

1. 工作液準(zhǔn)備

    對(duì)于TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（貨號(hào)：CA1610,，300T）

    本品以溶于甲醇的20μM儲(chǔ)存液形式提供,，總量為300μl,。按照100 nM的工作液濃度來換算,，可制備總量為60 ml的工作液。建議收到產(chǎn)品后,，根據(jù)單次使用量,，對(duì)母液進(jìn)行小量分裝，-20℃避光凍存,，一年穩(wěn)定,。

    開始實(shí)驗(yàn)前，使用1×PBS緩沖液稀釋儲(chǔ)存液到需要的工作濃度,。推薦工作濃度為：80~200nM,。工作液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.染色步驟

1）細(xì)胞爬片生長24h,，使其密度達(dá)到50%匯合度,。

2）吸掉培養(yǎng)液，37℃預(yù)熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細(xì)胞2次,。

3）使用溶于PBS的4%甲醛溶液進(jìn)行細(xì)胞固定,，室溫固定10min。

注意：避免固定劑中含有甲醇成分,，因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^程中可能破壞肌動(dòng)蛋白,。

4）室溫條件下，用PBS清洗細(xì)胞2~3次,，每次10min,。

5）室溫條件下，用丙酮（≤-20℃）脫水或者用0.5% Triton X-100溶液透化處理5min,。

6）室溫條件下,，用PBS清洗細(xì)胞2~3次，每次10min,。

7）取200μl配制好的TRITC標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液,，覆蓋住蓋玻片上的細(xì)胞，室溫避光孵育30min（通常情況下,，4℃~37℃孵育皆可）,。

注意：為了降低背景，可于TRITC標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽工作液內(nèi)加入1% BSA,；另外,，孵育過程中為了避免溶液揮發(fā)，可將蓋玻片轉(zhuǎn)移到一個(gè)密封的容器內(nèi)。

8）用PBS清洗蓋玻片3次,，每次5min,。

9）使用200μl DAPI溶液（濃度：100 nM）對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，約30s,。

10）用PBS清洗蓋玻片,，然后倒置在已經(jīng)滴有一滴Fluoromount-GTM 水溶性封片劑的載玻片上。使用紙巾輕輕檫掉多余封片劑,，然后用指甲油*封片,。此法制備的標(biāo)本玻片可置于4℃避光保存，通常6個(gè)月內(nèi)可繼續(xù)做F-actin染色分析,。

注意：也可以直接使用含有DAPI的抗熒光淬滅封片劑（貨號(hào)：36308ES11）合并步驟9）10）,，簡(jiǎn)化步驟。

11）熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察,，選擇TRITC激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=545/570nm）和DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）,。

羅丹明標(biāo)記鬼筆環(huán)肽 誰家是訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨,。 
2、部分非常用產(chǎn)品,，需提前1－2日預(yù)訂,，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3,、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期,、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn),。 
4,、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整,，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨,。
5、請(qǐng)辦理完貨款后,，將收據(jù),、底單等連同收貨人的地址、姓名,、等以傳真,、、短信,、等形式通知我們,。

運(yùn)輸說明：

1,、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,，再用泡沫盒密封,，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子,，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,。
2,、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸,。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封,，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中,，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,。
3,、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中,。