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植物花色苷含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào)：BC1380
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

產(chǎn)品說(shuō)明：
花色苷是一類可食用的易溶于水等溶劑的天然色素,?；ㄉ帐怪参锍尸F(xiàn)多彩的顏色，本身更具有多種保健作用,，因而在天然食用色素,、保健品和醫(yī)藥行業(yè)都有著廣闊的應(yīng)用前景。


根據(jù)花色苷在不同pH下的結(jié)構(gòu)性質(zhì)測(cè)定花色苷含量,，在pH為1時(shí)花色苷在530nm處有最大吸收峰,而當(dāng)pH為4.5時(shí),，花色苷轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)色查爾酮形式在530nm處無(wú)吸收峰，通過(guò)測(cè)定不同pH下的530nm和700nm處的吸光度值計(jì)算樣本中花色苷的含量,。
 注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì),、離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、1mL玻璃比色皿,、研缽/勻漿器和蒸餾水。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
按照樣本質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10的比例（建議稱取約 0.1g樣本，加入1mL提取液）,，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,， 封口膜封口防止揮發(fā)，60℃浸提30min,，期間可震蕩數(shù)次,，提取后提取液定容至1mL。12000rpm,，常溫離心10min,，取上清液待測(cè)。
二,、測(cè)定步驟

1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 加樣表：

充分混勻后測(cè)定測(cè)定管1和測(cè)定管2分別在530nm和700nm處的吸光度，測(cè)定管1在530nm和700nm處的吸光值記為A1,、A1’,，測(cè)定管2在530nm和700nm處的吸光值記為A2、A2’,，計(jì)算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）,。

三,、花色苷含量計(jì)算

1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

花色苷含量（μmol/g 質(zhì)量）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷W=0.037×ΔA×F÷W

1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算

花色苷含量（μmol/mg prot）=[ΔA÷(ε×d)×10³×F] ×V提取÷(Cpr ×V提取)=0.037×ΔA×F÷Cpr
F：稀釋倍數(shù),，該反應(yīng)體系下為10；d：比色皿光徑,，1cm,；W：樣本質(zhì)量，g,；ε：花色苷的摩爾消光系數(shù),，2.69×10⁴mL/mmol/cm；V提?。禾崛∫嚎傮w積,，1mL；10³：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),，1mmol=10³μmol,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL（蛋白濃度需用PBS單獨(dú)提取后自行測(cè)定）,。
注意事項(xiàng)：

1. 如果A1大于1,，可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)，保證總體積1mL不變,，如50μL上清液和950μL試劑一（相當(dāng)于稀釋20倍）,；如果A1小于0.1，可以適當(dāng)縮小稀釋倍數(shù),，保證總體積不變,，如500μL上清液和500μL試劑一（相當(dāng)于稀釋 2 倍），使A1保持在0.1~1范圍內(nèi),，可提高檢測(cè)靈敏度,；注意應(yīng)同樣調(diào)整上清液和試劑二體積比例；計(jì)算時(shí)以實(shí)際稀釋倍數(shù)代入計(jì)算公式中,。

2. 因提取液會(huì)使蛋白變性,，若使用蛋白濃度計(jì)算需用PBS單獨(dú)提取后自行測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g西梅皮加入1mL提取液充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,，封口膜封口防止揮發(fā),，60℃浸提30min，期間可震蕩數(shù)次，提取后提取液定容至1mL,，離心取上清后按照測(cè)定步驟操作,，測(cè)得計(jì)算ΔA=（A1-A1’）-（A2-A2’）=（0.249-0.101）-（0.133-0.065）=0.08，按樣本質(zhì)量計(jì)算含量得：花色苷含量（μmol/g質(zhì)量）=0.037×ΔA× F÷W =0.037×0.08×10÷0.1=0.296 μmol/g 質(zhì)量,。

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