日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

丁酰膽*酯酶（BchE）活性檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號: BC5970

規(guī)格: 50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入30mL試劑一，充分溶解,，-20℃分裝保存4周,，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明：

丁酰膽*酯酶（Butyrylcholinesterase,，BchE,，EC3.1.1.8）,，又稱血漿膽*酯酶，假性膽*酯酶,，是一種絲*酸水解酶,，由肝臟合成后進(jìn)入血液，幾乎存在于所有動物組織中,。BchE結(jié)構(gòu)與乙酰膽*酯酶（AchE）相似,，但底物特異性和抑制劑敏感性不同。與AchE相比,，BchE能夠有效水解較大的膽*酯,，如丁酰膽*和苯甲酰膽*，而且可以清除有機(jī)磷類農(nóng)藥,、氨基甲酸酯類農(nóng)藥等神經(jīng)毒劑的毒害作用,。有研究表明，BchE可作為阿爾茨海默病治療的重要靶點,。

BchE催化丁酰膽*水解生成膽*,，膽*與二硫?qū)ο趸郊姿幔?/span>DTNB）作用生成5-巰基-硝基苯甲酸（TNB）；TNB在412nm處有吸收峰,，通過測定412nm吸光度增加速率,，計算BchE活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、低溫離心機(jī),、分析天平,、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、1mL玻璃比色皿,、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水,。

操作步驟：

一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積（mL）=1：5~10比例加入試劑一（建議稱取0.1g樣本,，加入1.0mL試劑一），冰浴勻漿后,，于4℃,，12000rpm離心10min，棄沉淀,，取上清液置于冰上待測,。

2. 血清/血漿等液體樣本：直接測定,。若有渾濁請離心后取上清置于冰上待測。

3. 細(xì)菌,、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量10⁴個：試劑一體積（mL）500~1000:1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1 mL試劑一）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3s,，間隔7s,，總時間3 min），于4℃,，12000rpm離心10min,，棄沉淀，取上清液置于冰上待測,。

二,、測定步驟

1. 分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至412nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 操作表：（在1mL玻璃比色皿中加入下列試劑）

三,、BchE活性計算

1. 按照蛋白濃度計算

活性單位定義：每mg蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為1個酶活單位。

BchE活性(U/mg prot)=[ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹] ÷（Cpr×V樣）÷T×F=308.8×ΔA÷Cpr×F,。

2. 按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為1個酶活單位,。

BchE活性(U/g 質(zhì)量)=[ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹]÷（W×V樣÷V樣總）÷T×F=308.8×ΔA÷W×F。

3. 按照血清/血漿等液體體積計算

活性單位定義：每mL血清/血漿每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為1個酶活單位,。

BchE活性(U/mL)=[ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹]÷V樣÷T×F=308.8×ΔA×F,。

4. 按細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義：每萬個細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol TNB為1個酶活單位。

BchE活性(U/10⁴ cell)=[ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹]÷（N×V樣÷V樣總）÷T×F=308.8×ΔA÷N×F,。

ε：TNB摩爾消光系數(shù),，13.6×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V反總：反應(yīng)體系總體積，1.05mL=1.05×10^-3L,；10⁹：單位換算系數(shù),，1mol=1×10⁹nmol,；V樣：反應(yīng)體系加入樣本體積，0.05mL,；V樣總：加入試劑一體積,，1mL；Cpr：蛋白濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量，g,；T：反應(yīng)時間,，5min；F：樣本稀釋倍數(shù),；N：細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量,，以萬計。

注意事項：

1. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,，請嚴(yán)格控制反應(yīng)時間,，建議兩人進(jìn)行實驗，一人加樣,，一人計時,。

2. 如果?A測定接近?A空白，可以增加樣本量后再進(jìn)行測定,；如果A2測定大于1或ΔA測定大于0.7,，建議將樣本上清用試劑一適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定。注意同步修改計算公式,。

實驗實例：

1. 取0.1018g大鼠肝臟樣本,，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，離心后上清液用試劑一稀釋4倍,，按照測定步驟操作,，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定2-A測定1=0.6807-0.3913=0.2894，ΔA空白=A空白2-A空白1=0.3552- 0.2931= 0.0621,，ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.2273,，按樣本質(zhì)量計算得：

BchE活性（U/g 質(zhì)量）=[ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹]÷（W×V樣÷V樣總）÷T×F =2757.966 U/g 質(zhì)量。

2. 取馬血清樣本,，用試劑一稀釋64倍,，按照測定步驟操作，用1mL玻璃比色皿測得計算：ΔA測定=A測定2-A測定1=0.5100- 0.3436=0.1664,，ΔA空白=A空白2-A空白1=0.3552- 0.2931= 0.0621,，ΔA=ΔA測定-ΔA空白=0.1043，按液體體積計算得：

BchE活性（U/mL）=[ΔA÷（ε×d）×V反總×10⁹]÷V樣÷T×F =2061.302 U/mL,。

參考文獻(xiàn)：

[1] Ellman GL, Courtney KD, Andres V Jr. et al. A new and rapid colorimetric deter分鐘ation of acetylcholinesterase activity [J]. Biochemical Pharmacology, 1961, 7(2): 88-95.

[2] Yücel YY, Tacal O, Ozer I. Comparative effects of cationic triarylmethane, phenoxazine and phenothiazine dyes on horse serum butyrylcholinesterase [J]. Archives of Biochemistry and Biophysics, 2008, 478(2): 201-205.

[3] Jońca J, ?uk M, Was?g B. et al. New Insights into Butyrylcholinesterase Activity Assay: Serum Dilution Factor as a Crucial Parameter [J]. PLoS ONE, 2015, 10(10).

相關(guān)系列產(chǎn)品：

BC0840/BC0845  羧酸酯酶（CarE）活性檢測試劑盒

BC2020/BC2025 乙酰膽*酯酶（AchE）活性檢測試劑盒

BC2130/BC2135  組織及血液酸性磷酸酶（ACP）活性檢測試劑盒

BC2140/BC2145  組織及血液堿性磷酸酶（AKP/ALP）活性檢測試劑盒

 丁酰膽*酯酶活性檢測試劑盒 丁酰膽*酯酶活性檢測試劑盒