目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-常量法>>輔酶Ⅱ系列>> BC0400-50T/48S胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒 輔酶
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更新時(shí)間：2024-04-24 09:17:21瀏覽次數(shù)：1313評(píng)價(jià)
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| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T/48S |
| 貨號(hào) | BC0400 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒
胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
貨號(hào)：BC0400
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員,。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 粉劑×2支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：用時(shí)加入50 mL提取液溶解；
試劑二：用時(shí)每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用,；
試劑三：用時(shí)每支加275 μL雙蒸水充分溶解備用；
工作液配制：將試劑一,、試劑二,、試劑三按85：1：1的比例混合，現(xiàn)用現(xiàn)配,。
產(chǎn)品說明：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動(dòng)物,、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成α-酮戊二酸,，同時(shí)還原NADP+生成NADPH,。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源，在逆境中該酶活性通常會(huì)發(fā)生顯著變化,。
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng),，在340nm下測定NADPH濃度的增加，即可反映ICDHc活性,。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì),、恒溫水浴鍋,、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器,、1mL石英比色皿,、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水,。
“具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件"
注意事項(xiàng)：
1,、若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋,，使A2-A1小于0.5,，可提高檢測靈敏度。若初始值A1大于0.5可嘗試將酶液用提取液稀釋,。
2,、實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑二,、試劑三和樣本在冰上放置,，以免變性和失活；工作液37℃水浴放置,。
3,、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃蒸餾水,，將此燒杯放入37℃水浴鍋中,。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
4,、最好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí),，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
取0.1g稗草，加入1mL提取液,，進(jìn)行冰浴勻漿,，然后8000g 4℃離心10min,，取上清，之后按照測定步驟操作,，測得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.240-0.224=0.016,，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
ICDHc活性（U/g 質(zhì)量）=1608×ΔA÷W=257.28 U/g 質(zhì)量。
取0.1g小鼠肺部組織,，加入1mL提取液,，進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g 4℃離心10min,，取上清稀釋5倍,，之后按照測定步驟操作，測得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.253-0.141=0.112,，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
ICDHc活性（U/g 質(zhì)量）=1608×ΔA÷W×5=9004.8 U/g 質(zhì)量,。
取小鼠血清樣本直接檢測，測得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.225-0.2=0.025,，按血清計(jì)算得：
ICDHc活性（U/mL）=1608×ΔA=40.2 U/mL,。
參考文獻(xiàn)：
Miake F, TORIKATA T, KOGA K, et al. Isolation and characterization of NADP+-specific isocitrate dehydrogenase from the pupa of Bombyx mori[J]. The Journal of Biochemistry, 1977, 82(2): 449-454.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
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胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒 輔酶 胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）測試盒 輔酶
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