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組織鐵含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC4350

規(guī)格：50T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1,、 試劑一：臨用前配制,，取1瓶加入7.5 mL蒸餾水充分溶解，試劑一變黑后則不能使用，2-8℃保存一周,；

2,、 試劑二：臨用前配制，取1瓶加入375 μL冰 醋 酸,，加入12 mL蒸餾水充分溶解,；溶解后2-8℃保存一周；

3,、 標(biāo)準(zhǔn)液：1 μmol/mL Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液,。

4、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：臨用前取100μL 1 μmol/mL Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液,，加入700μL蒸餾水,，充分混勻，配制成0.125 μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，現(xiàn)用現(xiàn)配,。（實(shí)驗(yàn)中每管需要400μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差,，故配制大體積,。）

產(chǎn)品說明：

鐵是人體必須的微量元素之一，它是血紅蛋白,、肌紅蛋白,、細(xì)胞色素及其他酶系統(tǒng)的主要成分，幫助氧的運(yùn)輸,，促進(jìn)脂肪氧化,。缺乏鐵元素容易造成貧血、代謝紛亂,，并影響機(jī)體的免疫功能,。

技術(shù)指標(biāo)：

低檢出限：0.00009449 μmol/mL

線性范圍：0.0039-0.25 μmol/mL

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測,。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì),、低溫離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱/水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器,、氯仿,、冰乙酸,、冰和蒸餾水,。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,。4000g 4℃離心10分鐘，取上清,。

二,、測定步驟

1. 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min，波長調(diào)至520nm,。蒸餾水調(diào)零,。

2. 加樣表：

三,、組織鐵含量計(jì)算

1．按組織質(zhì)量計(jì)算

組織鐵含量（μg/g 質(zhì)量）=（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×55.845÷W=6.98×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W

2．按組織蛋白濃度計(jì)算

組織鐵含量（μg/mg prot）=（C標(biāo)準(zhǔn)液×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)）×V提取×55.845÷（Cpr×V提取）

=6.98×ΔA測定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.125μmol/mL Fe³⁺標(biāo)準(zhǔn)液,；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g,；V提取：提取液體積,，1mL,；55.845：Fe的相對分子質(zhì)量，55.845μg/μmol,。

注意事項(xiàng)：

1,、 當(dāng)ΔA大于0.9 時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后進(jìn)行測定,；ΔA過小時(shí),，可增加加入的樣本體積來測定。

2、 試劑一溶解變黑后則不能使用,；試劑二有毒性,，做好防護(hù)措施。

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