目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4315-100T/48S蔗糖合成酶活性檢測試劑盒 微量法
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更新時(shí)間：2024-04-16 13:10:34瀏覽次數(shù)：596評(píng)價(jià)
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| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號(hào) | BC4315 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 蔗糖合成酶活性檢測 |
蔗糖合成酶（分解方向,；SS-I）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號(hào): BC4315
規(guī)格: 100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員,。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑三 | 液體8 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1,、 試劑二：臨用前加入2.5 mL試劑一充分溶解待用，用不完的試劑建議分裝后,，-20℃保存,，避免反復(fù)凍融；
2,、 標(biāo)準(zhǔn)品：20 mg果糖,，臨用前加入1 mL蒸餾水溶解，配成20 mg/mL果糖溶液備用,，2-8℃保存一周,。
產(chǎn)品說明：
蔗糖合成酶（Sucrose Synthase，SS）是植物糖代謝過程的關(guān)鍵酶,，負(fù)責(zé)催化蔗糖分解與合成的可逆反應(yīng),，其分解活性可以催化蔗糖水解成UDPG與果糖， 參與淀粉,、纖維素和半纖維素的合成等代謝途徑,。
分解方向SS-I催化蔗糖和UDP生成果糖與UDPG，果糖與3,5 –二硝基水楊酸反應(yīng)生成在540nm有特征吸收峰的棕紅色物質(zhì),，通過測定540nm處吸光值變化可計(jì)算得SS-I活性,。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測,。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式低溫離心機(jī),、水浴鍋,、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器,、冰和蒸餾水、EP管。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液,，冰浴勻漿后于4℃,，8000g，離心10min,，取上清置于冰上待測,。
二,、測定步驟
1,、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm,，蒸餾水調(diào)零,。
2,、 將20mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋為8、6,、5,、4、3,、2,、1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
3,、 操作表 (在1.5mL離心管中操作) ：
試劑名稱（µL） | 對(duì)照管 | 測定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本 | 10 | 10 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | - | 10 | - |
蒸餾水 | - | - | - | 10 |
試劑一 | 40 | 40 | 40 | |
試劑二 | - | 40 | - | - |
混勻,，30℃水浴30 min后，95℃水浴10 min（蓋緊,，防止水分散失）,。 | ||||
試劑三 | 50 | 50 | 50 | 50 |
混勻，95℃水浴5 min（蓋緊,，防止水分散失）,，冷卻至室溫。 | ||||
蒸餾水 | 400 | 400 | 400 | 400 |
混勻,，取200µL置于微量玻璃比色皿或96孔板中,，測定540nm處吸光值A，分別記為A對(duì)照管,，A測定管,，A標(biāo)準(zhǔn)管，A空白管,。計(jì)算ΔA=A測定管-A對(duì)照管,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管（標(biāo)準(zhǔn)曲線只需檢測1-2次）。 | ||||
三,、SS-I活性計(jì)算
1,、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為x軸，其對(duì)應(yīng)的ΔA標(biāo)準(zhǔn)為y軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，得到標(biāo)準(zhǔn)方程y=kx+b，將ΔA帶入方程得到x（mg/mL）,。
2,、 SS-I活性的計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活定義：每mg蛋白每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg果糖為1個(gè)酶活力單位。
SS- I酶活（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）×103÷T=33.33x÷Cpr,。
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：每g樣本每分鐘分解蔗糖產(chǎn)生1µg果糖為1個(gè)酶活力單位,。
SS- I酶活（U/g質(zhì)量）=x×V提取×103÷W÷T=33.33x÷W。
V提?。禾崛∫后w積,，1mL；103：單位換算系數(shù),，1mg=103µg,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL,，蛋白濃度自行測定,；W：樣本質(zhì)量，g,；T：反應(yīng)時(shí)間：30min,。
注意事項(xiàng)：
1. 當(dāng)A或ΔA超過1.5時(shí)，建議將樣本用提取液稀釋后再進(jìn)行測定,，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù),。
2. 95℃水浴時(shí)EP管蓋緊，防止水分散失,，待冷卻至室溫后（建議每次實(shí)驗(yàn)后冷卻時(shí)間保持一致）,，再進(jìn)行下一步操作，避免液體飛濺燙傷以及影響試驗(yàn)數(shù)據(jù),。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1. 取0.1g黑麥草加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,，取上清后按照測定步驟操作，用96孔板測得A對(duì)照管=0.111,，A測定管=0.408,，標(biāo)準(zhǔn)曲線y =0.1231x-0.0365，A空白管=0.050,，計(jì)算ΔA=A測定管-A對(duì)照管=0.408-0.111=0.297，x= (0.297+0.0365) ÷0.1231=2.7092，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：
SS-I酶活（U/g質(zhì)量）=33.33x÷W=33.33×2.7092÷0.1= 902.976 U/g質(zhì)量,。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0580/BC0585 蔗糖合成酶（SS）活性檢測試劑盒
BC0600/BC0605 蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性檢測試劑盒
BC0570/BC0575 中性轉(zhuǎn)化酶（NI）活性檢測試劑盒
BC2460/BC2465 植物蔗糖含量檢測試劑盒
蔗糖合成酶活性檢測試劑盒 微量法 蔗糖合成酶活性檢測試劑盒 微量法
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