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Aureobasidin A(AbA)金擔子素A
貨號:A6870
規(guī)格:1mg
分子式 : C60H92N8O11
分子量 : 1100
儲存條件 : 冰袋運輸。4℃保存,。
純度 : ≥95%
外觀(性狀) : 熔點 155-157℃
單位 : 瓶
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價: | 選擇規(guī)格 |
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A6870-1mg | Solarbio | 1mg | 1900.00元 |
金擔子素A(Aureobasidin A,,AbA)是從絲狀真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分離出來的環(huán)酯肽類抗生素,具有很強的抗真菌能力,。在較低的濃度下(0.1-0.5 μg/ml)即可對酵母產(chǎn)生毒性,。對其敏感的真菌種類包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe),、光滑念珠菌(Candida glabrata),、構巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.),。作用機制在于AbA抑制了真菌生長所依賴的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,,干擾鞘脂合成,,從而進一步殺死菌株。編碼IPC合成酶的基因研究較多的有來自釀酒酵母菌的AUR1 基因,,以及構巢曲霉的AURA基因,,兩者具有同源性。通過對這些編碼基因進行突變即可使得菌株對AbA產(chǎn)生抗性,,如AUR1-C基因,。
AbA非常適合用作陽性克隆子篩選用的藥物選擇性標記。AbA抗性也是酵母單/雙雜交研究中理想的報告子,。本品為溶于甲醇的AbA溶液,,濃度為1 mg/ml。具體的工作濃度取決于宿主細胞的敏感度(見表1. AbA對各種酵母菌的低抑菌濃度(MIC)),。
操作步驟(抗AbA的酵母轉化系統(tǒng))
1)加入0.5 ml培養(yǎng)的酵母到50 ml YPD培養(yǎng)基中(配方:1L液體培養(yǎng)基含有10g yeast extract,,20g polypeptone, 20g D-glucose,;固體培養(yǎng)基另外加入2%瓊脂,;)。
2)30℃培養(yǎng)約6小時,,測定OD660為1~2,。使用二倍體時,測定OD660為2~4,。
3)1,000×g離心5分鐘,。
4)用10 ml Solution A(配方:100 mM Lithium acetate,10 mM Tris-HCl pH 7.5,,1 mM EDTA)懸浮沉淀,,1,000×g離心5分鐘。
5)用Solution A重懸沉淀,,直到OD660為150,。
6)在管內(nèi)分取100 µl細胞懸浮液,30℃培養(yǎng)1小時,。
7)加入5 μg載體(環(huán)狀或線性DNA)和150 μg Carrier DNA(已經(jīng)過100℃加熱10分鐘,,并迅速冷卻)。
【注】:pAUR101需使用線性DNA進行轉化,。使用環(huán)狀DNA會降低轉化效率甚轉化不成功,。pAUR112和pAUR123需使用完整的質(zhì)粒DNA進行轉化。
8)加入850 µl Solution B(配方:取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 ml Solution A充分溶解,,需要現(xiàn)用現(xiàn)配),,輕輕混勻,。
9)30℃培養(yǎng)30分鐘后,42℃培養(yǎng)15分鐘,。
10)室溫放置10分鐘,。
11)5,000 rpm離心1分鐘,用5 ml YPD培養(yǎng)基懸浮沉淀,。
12)30℃培養(yǎng)6小時~,。
13)5,000~10,000 rpm離心,用1-10 ml 0.9% NaCl懸浮沉淀,。
14)在YPD選擇培養(yǎng)基平板(含有一定濃度的AbA,,依菌株類型而定)上接種100 µl細胞懸液。30℃培養(yǎng)3-4天后轉化完成,。
15)挑取陽性轉化子,,和/或測定轉化效率(以每微克質(zhì)粒DNA轉化的菌落數(shù)來表示)。
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Aureobasidin A(AbA)金擔子素A訂購說明:
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3,、部分產(chǎn)品價格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化,,若有變動以訂貨當日新價格為準,。
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