目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5895-100T/48S蛋白質(zhì)游離巰基含量檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC5895 | 應用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 蛋白質(zhì)游離巰基含量檢測 |
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液一 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 提取液二 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 液體120 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體7 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑四 | 液體1mL×1支 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
提取液配制：臨用前根據(jù)樣本量按照提取液一：提取液二=1mL：1 mL進行配制,，請勿一次性全部混合,。
若試劑二有析出,，可置于37℃水浴加熱至澄清透明后使用,。
標準品：10mg還原型谷*甘肽（GSH）,。臨用前加入1.3mL蒸餾水配置成25μmol/mL，2-8℃保存4周,。
0.125μmol/mL標準品配制：取50μL 25μmol/mL標準品,，加入950μL蒸餾水，充分混勻,，配制成1.25μmol/mL的標準品,；然后取100μL 1.25μmol/mL標準品,，加入900μL蒸餾水,，充分混勻，配制成0.125μmol/mL的標準品備用,，現(xiàn)配現(xiàn)用,。
組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液,，冰浴勻漿后于4℃,，3000rpm 離心10min，棄上清,。在沉淀中加入2mL試劑一,，攪勻后溶解沉淀，沉淀溶解液作為樣本進行實驗,。（注：（1）植物葉片等纖維含量較高的樣本,，溶解沉淀后4℃ 3000rpm離心3min，取上清作為樣本進行實驗,,；（2）加入試劑一后會有大量氣泡產(chǎn)生,，請緩慢加入，建議使用5mL的EP管）,。
細菌/細胞：按照細菌/細胞數(shù)量（106個）：提取液體積（mL）為5~10：1的比例（建議5百萬細菌/細胞加入1mL提取液）,，冰浴超聲波破碎（功率200W，超聲3秒,，間隔10秒,，總時間3min）后，于4℃,，3000rpm 離心10min,，棄上清,。在沉淀中加入2mL試劑一，攪勻后溶解沉淀,，沉淀溶解液作為樣本進行實驗,。（注：（1）若沉淀溶解不全，可4℃ 3000rpm離心3min,，取上清作為樣本進行實驗,；（2）加入試劑一后會有大量氣泡產(chǎn)生，請緩慢加入,，建議使用5mL的EP管）,。
血清/血漿、牛奶等液體：取100μL液體樣本加入0.9mL丙 酮,，4℃,，3000rpm 離心10min，棄上清,。在沉淀中加入2mL試劑一,，攪勻后溶解沉淀，沉淀溶解液作為樣本進行實驗,。（注：若測定數(shù)值偏小,，可改變樣本與丙 酮的比例，如取0.2mL液體樣本加入0.8mL丙 酮或0.3mL液體樣本加入0.7mL丙 酮,，注意同步修改計算公式）,。
可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至412nm,，分光光度計用蒸餾水調(diào)零。
操作表：（建議在2mL的EP管中操作）
| 試劑名稱（mL） | 對照管 | 測定管 | 空白管 | 標準管 |
| 樣本 | 0.3 | 0.3 | - | - |
| 蒸餾水 | - | - | 0.3 | - |
| 標準品 | - | - | - | 0.3 |
| 提取液 | 0.18 | 0.18 | 0.18 | 0.18 |
| 請緩慢加入提取液混勻,，并用吸頭反復吹打至氣泡不再產(chǎn)生（期間會有大量氣泡產(chǎn)生,，開蓋放置） | - | - | ||
| 試劑二 | 0.18 | 0.18 | 0.18 | 0.18 |
| 充分混勻，4℃ 3000rpm離心10min后取上清于1.5mL EP管/96孔板中 | - | - | ||
| 上清液 | 0.14 | 0.14 | 0.14 | 0.14 |
| 試劑三 | 0.06 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
| 試劑四 | - | 0.01 | 0.01 | 0.01 |
| 充分混勻,，室溫靜置10min后,，412nm下測定吸光度，分別記為A對照,、A測定,、A空白,、A標準,。計算ΔA測定=A測定-A對照，ΔA標準=A標準-A空白,?？瞻坠芎蜆藴使苤恍铚y1-2次,。每個測定管需設(shè)一個對照管。 | ||||
按照樣本蛋白濃度計算：
按照樣本質(zhì)量計算：
按照液體體積計算：
按照細胞/細菌數(shù)量計算：
若樣本ΔA測定<0.01，可適當增大樣本量后測定,，注意同步修改空白管和標準管及計算公式,；若樣本ΔA測定>1.5，可用試劑一稀釋沉淀溶解液后測定,，注意同步修改計算公式中的稀釋倍數(shù),。
可使用BCA法測定蛋白濃度。
取100μL馬血清,，按照測定步驟操作,，用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.113-0.047=0.066，ΔA標準=A標準-A空白=0.417-0.105=0.312,，按樣本液體體積計算蛋白質(zhì)游離巰基含量得：蛋白質(zhì)游離巰基含量（μmol/mL）=2.5×ΔA測定÷ΔA標準×F =0.529μmol/mL,。
取0.1036g鼠肝，按照測定步驟操作,，用96孔板測得ΔA測定=A測定-A對照=0.261-0.105=0.156,，ΔA標準=A標準-A空白=0.417-0.105=0.312，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)游離巰基含量得：蛋白質(zhì)游離巰基含量（μmol/g 質(zhì)量）=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =1.207μmol/g 質(zhì)量,。
取0.1078g黃豆粉,，沉淀溶解液用試劑一稀釋2倍后，按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對照=0.123-0.070=0.053,，ΔA標準=A標準-A空白=0.417-0.105=0.312,，按樣本質(zhì)量計算蛋白質(zhì)游離巰基含量得：蛋白質(zhì)游離巰基含量（μmol/g 質(zhì)量）=0.25×ΔA測定÷ΔA標準÷W×F =0.788μmol/g 質(zhì)量。
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