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參考價(jià)	面議

生化檢測(cè)試劑盒-微量法

水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力

血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測(cè)盒

微量法生化試劑盒

CAS	詳詢(xún)	純度	詳詢(xún)
分子量	詳詢(xún)	分子式	詳詢(xún)
供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	100T/96S
貨號(hào)	BC4175-100T/96S	應(yīng)用領(lǐng)域	環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途	肉桂醇脫氫酶(CAD)活性檢測(cè)

儲(chǔ)存條件
-20℃
中文名稱(chēng)
肉桂醇脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒微量法
有效期
6個(gè)月
單位
盒
推薦
若使用96孔板測(cè)定，需使用96孔UV板，推薦貨號(hào)YA0602
英文名稱(chēng)
Cinnamyl Alcohol dehydrogenase Dehydrogenase(CAD) Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader

詳細(xì)介紹

肉桂醇脫氫酶（CAD）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào)：BC4175
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱(chēng)	規(guī)格	保存條件
提取液	液體120 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	粉劑×1瓶	-20℃保存
試劑二	液體×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體25 mL×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

提取液：內(nèi)含不溶物,，使用前搖勻,。
試劑一：臨用前加入5 mL試劑三溶解?？扇芙夂蠓盅b-20℃保存,，避免反復(fù)凍融。
試劑二：液體置于試劑瓶?jī)?nèi)玻璃管中,。臨用前加入15 mL乙醇充分混勻,，配好后2-8℃保存。
工作液的配制：將試劑一,、試劑二,、試劑三按1:1:2（V:V:V）的比例配制工作液，工作液現(xiàn)用現(xiàn)配,。

產(chǎn)品說(shuō)明：
CAD 是木質(zhì)素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶之一,，催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成與之相應(yīng)的肉桂醇,。該酶多存在于高等植物,、酵母、菌類(lèi)中,，研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理,，為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù),。
CAD 催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP⁺，在340nm下測(cè)定NADPH消耗速率,，即可反映CAD活性,。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè),。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、低溫離心機(jī)、水浴鍋,、微量石英比色皿/96孔UV板,、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器,、冰,、乙醇和蒸餾水,。
操作步驟：
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織,，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g,，4℃,，離心10min，取上清,，置冰上待測(cè),。
2、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率或200W,，超聲3s，間隔10s,，重復(fù)30次）,；10000g 4℃離心10min，取上清,，置冰上待測(cè),。
二、測(cè)定步驟

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,，紫外分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零,。
操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑：

試劑名稱(chēng)	空白管	測(cè)定管
樣本（µL）		20
蒸餾水（µL）	20
工作液（µL）	180	180
在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入上述試劑，充分混勻后于340nm處測(cè)定10s時(shí)的吸光值A1,，迅速置于25℃水浴或培養(yǎng)箱5min（酶標(biāo)儀有控溫功能可將溫度調(diào)至25℃）,，拿出迅速擦干測(cè)定5min10s時(shí)的吸光值A2，計(jì)算ΔA測(cè)定管=A1測(cè)定-A2測(cè)定,，ΔA空白管=A1空白-A2空白,，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。

三,、CAD酶活計(jì)算
A,、按微量石英比色皿計(jì)算：
1、按蛋白濃度計(jì)算
酶活定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
CAD酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=321.54×ΔA÷Cpr
2,、按樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
CAD酶活（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=321.54×ΔA÷W
3,、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
酶活定義：每10⁴個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
CAD酶活（U/10⁴ cell）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（500×V樣÷V樣總）÷T= 0.643×ΔA
ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³L/mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積,，2×10^-4L,；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.02mL,；V樣總：加入提取液體積,，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/mL,，蛋白濃度自行測(cè)定；W：樣本質(zhì)量,，g,；T：反應(yīng)時(shí)間，5min,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500萬(wàn)；10⁹：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),，1mol=10⁹nmol,。
B、按96孔UV板計(jì)算：
將將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm（96孔板光徑）進(jìn)行計(jì)算即可。

注意事項(xiàng)：

當(dāng)A1小于0.8,，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,。
空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔，正常情況下,，變化不超過(guò)0.04,。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

取約0.1g三葉草葉，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,，然后10000g,，4℃，離心10min,，取上清,，按照測(cè)定步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)定計(jì)算ΔA測(cè)定管= A1測(cè)定-A2測(cè)定=1.7889-1.7045=0.0844,，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9630-0.9433=0.0197,，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.0844-0.0197=0.0647，按樣本質(zhì)量計(jì)算得：CAD酶活（U/g 質(zhì)量）=321.54×ΔA÷W=208.0364 U/g 質(zhì)量,。