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單寧酶活性檢測試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作,。
貨號：BC4070
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前取1支加入1.5 mL無水乙醇混勻溶解，用不完的試劑可以2-8℃保存一周,；

2. 標(biāo)準品：5 mg沒食子酸丙酯,。臨用前加入1.178 mL無水乙醇充分混勻溶解，配成20 μmol/mL的標(biāo)準溶液,，2-8℃保存兩周。

產(chǎn)品說明：
單寧酶全稱是單寧酯酰水解酶(Tannase,，EC 3.1.1.20),，存在于富含單寧的植物，也廣泛存在于微生物中,，可以水解酯鍵和縮酚羧鍵，生成沒食子酸和葡萄糖,。
使用沒食子酸丙酯（PG）作為單寧酶酶促反應(yīng)的底物,，其在270nn下有特征吸收峰，根據(jù)其反應(yīng)前后吸光度的變化來計算單寧酶活力,。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計,、1mL石英比色皿、低溫離心機,、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、超聲破碎儀、研缽/勻漿器,、乙醇、冰和蒸餾水,。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）
1,、組織：稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液，冰浴勻漿,。10000rpm，4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。
2、細胞或細菌樣本的制備：先收集細胞或細菌樣本到離心管內(nèi)，棄上清,，按照每500萬細胞或細菌加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200W,，超聲3s，間隔10s,，重復(fù)30次）,。10000rpm，4℃離心10min,，取上清，置冰上待測,。
二、測定步驟

1. 紫外分光光度計預(yù)熱30min,，波長調(diào)至270nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 標(biāo)準液的稀釋：取10μL 20μmol/mL的標(biāo)準溶液，加入3990μL提取液,，充分混勻，配制成0.05μmol/mL標(biāo)準液使用,，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要1000μL,，為減小實驗誤差，故配制大體積,。）

3. 對照管樣本處理：吸取0.1mL樣本于1.5mLEP管中作為對照管，沸水浴5min,，冷卻至常溫待測,。

4. 加樣表（在1.5mLEP管中分別加入）

注意事項：
如果A測定大于1.5,，可以適當(dāng)加大稀釋倍數(shù)，保證總體積1mL不變,，如20μL上清液和980μL提取液（相當(dāng)于F=1000/20=50），計算公式中需改變F和V上清液的數(shù)值,。
實驗實例：

1. 取0.1g玉蘭葉加入1mL提取液進行勻漿研磨,，取上清后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A對照-A測定=1.126-1.033=0.093,，按樣本質(zhì)量計算酶活得：單寧酶（U/g質(zhì)量）=1000×ΔA÷A標(biāo)準÷W=1000×0.093÷0.609÷0.1=1527.09 U/g 質(zhì)量,。

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC1360/BC1365 尿酸（UA）含量檢測試劑盒
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