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雙縮脲法蛋白含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào): BC3180
規(guī)格: 50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
提取液：自備,。根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水。
產(chǎn)品說(shuō)明:
樣本可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算,。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析,。
強(qiáng)堿性溶液中,，雙縮脲與CuSO₄形成紫色絡(luò)合物；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無(wú)關(guān),，故可用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。該方法適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣本,，尤其是動(dòng)物材料,。
技術(shù)指標(biāo)：
低檢出限：0.1304 mg/mL
線(xiàn)性范圍：0.5-10 mg/mL
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè),。
需自備的儀器和用品：
離心機(jī),、可見(jiàn)分光光度計(jì)、移液器,、1mL玻璃比色皿,、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水,。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、液體樣本：澄清無(wú)色液體樣本可以直接測(cè)定,。
2,、組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液）冰浴勻漿,，8000g,，4℃離心10min，取上清,，即待測(cè)液,。（動(dòng)物樣本常常需要稀釋?zhuān)?/span>
3、細(xì)菌,、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒,，間隔7秒,，總時(shí)間3min）；然后8000g,，4℃,，離心10min，取上清置于冰上待測(cè),。
二,、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到540nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL蒸餾水,，1000μL試劑一,，混勻后室溫靜置15min，于540nm比色,，記為A空白管,。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL標(biāo)準(zhǔn)液,，1000μL試劑一,，混勻后室溫靜置15min，于540nm比色,，記為A標(biāo)準(zhǔn)管,。

4. 測(cè)定管：取1mL玻璃比色皿，加入200μL待測(cè)液,，1000μL試劑一,，混勻后室溫靜置15min,，于540nm比色，記為A測(cè)定管,。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定1-2次,。

注意事項(xiàng)：

1. 樣本蛋白濃度須在0.5~10mg/mL范圍內(nèi)，低于0.5mg/mL不能用此法,，高于10mg/mL須做相應(yīng)稀釋,。因此測(cè)定前用1~2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在0.5~10mg/mL范圍內(nèi),。

2. 如果吸光值大于0.44,，則需要將樣本用蒸餾水稀釋后再測(cè)定。

3. 待測(cè)樣本蛋白提取可用生理鹽水,、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取,。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾,，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì),；否則改用BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。

雙縮脲法蛋白含量檢測(cè)試劑盒