目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC3365-100T/96SUDPG焦磷酸化酶檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC3365-100T/96S | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：UDPG焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關(guān)鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催 |
UDPG焦磷酸化酶（UGP）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作,。
貨號: BC3365
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
| 試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
| 試劑四 | 粉劑×2支 | -20℃保存 |
| 試劑五 | 液體2.5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑六 | 液體5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
試劑一：臨用前加15 mL蒸餾水充分溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存可保存4周,，禁止反復(fù)凍融。
試劑二：臨用前加1.25 mL蒸餾水充分溶解,；用不完的試劑分裝后2-8℃保存2周,。
試劑三：臨用前加0.7mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃可保存4周,，禁止反復(fù)凍融,。
試劑四：臨用前每支加1 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃可保存2周，禁止反復(fù)凍融,。
工作液的配制：將試劑一：試劑二：試劑三：試劑四：試劑五：試劑六按體積比=600：100：20：40：100：250混合,，現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說明：
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase,，UGP,，EC 2.7.7.9）在自然界廣泛分布。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化,，將1-磷酸葡萄糖與UTP分子合成為UDP-葡萄糖（UDPG）,，UDPG是高等植物和動物中主要活化酶的形式，作為葡萄糖基供體參與糖原,、蔗糖,、纖維素等的合成代謝。
UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖,，其在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將NADP轉(zhuǎn)化為NADPH,，UGP活性可以用340nm的吸光值的變化來反應(yīng)。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測,。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機,、水浴鍋,、微量石英比色皿/96孔UV板、可調(diào)式移液槍,、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀,、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后10000g,，4℃,，離心10min，取上清置于冰上待測,。
細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液）,，冰浴超聲破碎細胞（功率300w，超聲3秒,，間隔7秒,，總時間3min）；然后10000g,，4℃,，離心10min，取上清置于冰上待測。
血清等液體：直接檢測,。
二,、測定步驟
紫外分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm,，蒸餾水調(diào)零,。
操作表：
| 試劑名稱 | 空白管 | 測定管 |
| 樣本（µL） | - | 20 |
| 工作液（µL） | 180 | 180 |
| 蒸餾水（µL） | 20 | - |
| 在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入上述試劑，充分混勻后于340nm處測定10s時的吸光值A1,，迅速置于37℃水浴鍋或者培養(yǎng)箱5min（酶標儀有控溫功能的可將溫度調(diào)至37℃）,，拿出迅速擦干測定310s時的吸光值A2，計算ΔA測定管= A2測定-A1測定,，ΔA空白管=A2空白-A1空白,，ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。 | ||
注意事項：
空白管為檢測各試劑組分質(zhì)量的檢測孔,，正常情況下,，變化不超過0.01,。
A大于0.6或者A2測定大于1.5時,，建議將樣本稀釋后再進行測定。當ΔA小于0.01時,，可以延長反應(yīng)時間（5min或10min）來測定,。
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