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β-木糖苷酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作,。
貨號(hào)：BC2625
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前取1支加入0.555 mL蒸餾水充分溶解,；用不完的試劑建議-20℃分裝保存2周,，避免反復(fù)凍融（1支粉劑溶解后可做48S，為了延長(zhǎng)使用時(shí)間,，此產(chǎn)品多給1支粉劑）；

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：5μmol/mL對(duì)硝基 苯*溶液,。

產(chǎn)品說(shuō)明：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物,、細(xì)菌和真菌等生物體，是催化木聚糖類(lèi)半纖維素降解的關(guān)鍵酶,，產(chǎn)物木糖可作為碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵,。另外，β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè),，比傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,，具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
β-木糖苷酶催化對(duì)硝基 苯*-β-D-木糖苷產(chǎn)生對(duì)硝基 苯*,，對(duì)硝基 苯*在405nm處有特征吸收峰,，測(cè)定405nm光吸收增加速率，可計(jì)算β-木糖苷酶活性,。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
天平,、低溫離心機(jī),、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板,、研缽/勻漿器,、水浴鍋、蒸餾水,、超聲破碎儀,。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件

• 樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1,、植物樣本：稱(chēng)取約0.1g樣本,，加1mL提取液充分冰浴勻漿，然后12000rpm,，4℃,，離心20min,，棄沉淀，取20μL上清測(cè)定蛋白含量,，剩余上清作為待測(cè)酶液,。

1. 細(xì)菌、真菌樣本：收集約500萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,，加入1mL提取液,，超聲波破碎（冰浴，功率200w,，超聲3秒,，間隔7秒，總時(shí)間3min）,；然后10000rpm,，4℃，離心10min,，棄沉淀 ,，取20μL上清測(cè)定蛋白含量，剩余上清置于冰上待測(cè),。

二,、測(cè)定步驟

1. 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405nm,，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋：用試劑二將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至0.2、0.1,、0.05,、0.025、0.0125,、0.00625μmol/mL,，稀釋可參考下表。

備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需40µL標(biāo)準(zhǔn)溶液,。

1. 樣本測(cè)定：

三,、β-木糖苷酶活性計(jì)算
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度（y，μmol/mL）和吸光度ΔA標(biāo)準(zhǔn)（x,，ΔA標(biāo)準(zhǔn)）,，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,，將ΔA測(cè)定（x,，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（y，μmol/mL）,。
1,、按樣本蛋白濃度計(jì)算：
酶活定義：45℃，pH7.4時(shí),，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基 苯 *的酶量為一個(gè)酶活單位。
β-木糖苷酶活性（U/mg prot）=(y×V樣)÷(V樣×Cpr)÷T=0.05×y÷Cpr
2,、按樣本質(zhì)量計(jì)算：
酶活定義：45℃,，pH7.4時(shí)，每克樣本1min內(nèi)催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基 苯 *的酶量為一個(gè)酶活單位,。
β-木糖苷酶活性（U/g 質(zhì)量）＝(y×V樣)÷(W×V樣÷V樣總)÷T=0.05×y ÷W
3. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：
酶活定義：45℃,，pH7.4時(shí)，每10⁴個(gè)細(xì)胞1min內(nèi)催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基 苯 *的酶量為一個(gè)酶活單位,。
β-木糖苷酶活性（U/10⁴ cell）= (y×V樣)÷(500×V樣÷V樣總)÷T=0.0001×y
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL； V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積,，0.04mL,；V樣總：加入提取液體積，1mL,；W：樣本質(zhì)量,，g；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),，500萬(wàn),；T：反應(yīng)時(shí)間，20min,。

注意事項(xiàng)：

1. 吸光度變化應(yīng)該控制在0.05~0.6之間,。否則加大樣本量或稀釋樣本，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

2. 樣本蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定,。

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0360/BC0365  β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性檢測(cè)試劑盒
BC2550/BC2555  α-葡萄糖苷酶（α - GC）活性檢測(cè)試劑盒
BC2560/BC2565  β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性檢測(cè)試劑盒
BC2570/BC2575  α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性檢測(cè)試劑盒
 

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