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?；D(zhuǎn)移酶（AAT）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
貨號(hào)：BC2355
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1. 提取液：內(nèi)含不溶物，使用前搖勻,。

2. 試劑二：臨用前取一支試劑二加1 mL蒸餾水充分溶解,，未用完的試劑2-8℃可以保存2周。(為了延長(zhǎng)使用時(shí)間,，因此多給一支試劑二)

產(chǎn)品說(shuō)明：
AAT是一個(gè)多功能蛋白大家族,，主要負(fù)責(zé)催化生物體內(nèi)各種酰基化和去?；磻?yīng),，在基因表達(dá)、代謝和信號(hào)傳導(dǎo)中具有重要作用,。
AAT催化乙酰CoA轉(zhuǎn)移乙?；蕉〈迹瑫r(shí)還原DTNB生成TNB,；TNB在412nm有吸收峰,，測(cè)定412 nm吸光度增加速率，來(lái)計(jì)算AAT活性,。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器,、微量玻璃比色皿/96孔板,、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水,。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一,、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿。4℃,，15000 g離心20min,，取上清液待測(cè)。
2,、血清（漿）樣本：直接檢測(cè),。（若液體有渾濁則離心后進(jìn)行測(cè)定）
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min 以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm,，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一在37℃水浴保溫20 min以上,。

3. 樣本測(cè)定：

將上述試劑按順序加入微量石英比色皿/96孔板中,，加試劑四的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在412nm波長(zhǎng)下記錄10s時(shí)的初始吸光度A1和130s后的吸光值A2,，計(jì)算ΔA空=A2空-A1空,；ΔA測(cè)=A2測(cè)-A1測(cè)，ΔA=ΔA測(cè)-ΔA空,。空白管只需做1-2次,。

注意事項(xiàng)：

1. 上清液蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。

2. 當(dāng)吸光值大于1時(shí),，建議稀釋后測(cè)量,。

3. 建議一個(gè)一個(gè)樣本測(cè)定，一人比色一人計(jì)時(shí),。

4. 如果ΔA測(cè)小于0.01,，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，如測(cè)定10 s和310 s的吸光度,，相應(yīng)修改計(jì)算公式中反應(yīng)時(shí)間,。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g腎臟加入1mL提取液進(jìn)行樣本處理，取上清后稀釋4倍后按測(cè)定步驟操作,，用微量石英比色皿測(cè)得ΔA空=A2空-A1空=0.0849-0.08=0.0049,、ΔA測(cè)=A2測(cè)-A1測(cè)=0.69-0.4929=0.1971、ΔA=ΔA測(cè)-ΔA空=0.1971-0.0049 =0.1922,，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：AAT (U/g 質(zhì)量) =5000×ΔA÷W×4（稀釋倍數(shù)）=38440 U/g 質(zhì)量,。

2. 取兔血清直接按照測(cè)定步驟操作，測(cè)得ΔA空=A2空-A1空=0.0849-0.08=0.0049、ΔA測(cè)=A2測(cè)-A1測(cè)=0.629-0.5342 =0.0948,、ΔA=ΔA測(cè)-ΔA空=0.0948-0.0049=0.0899,，按血清體積計(jì)算酶活得：AAT (U/mL 血清) =5000×ΔA=5000×0.0899=449.5 U/mL 血清。

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