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糜*白酶活性檢測
試劑盒說明書
微量法
貨號：BC2335
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前溶于1.6 mL甲醇中,，再用水定容至10 mL?？煞盅b后-20℃保存,，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品說明：
糜*白酶,，又稱胰凝*蛋白酶,，是胰腺分泌的一種蛋白水解酶，能迅速分解變性蛋白質(zhì),。糜*白酶的功能與胰蛋*酶相似,，但是具有分解能力強(qiáng)、毒性低和不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn),。臨床上糜*白酶用于痰液稀化,，對膿性和非膿性痰液均有效,；也用于創(chuàng)傷或手術(shù)后傷口愈合，如白內(nèi)障摘除,。
糜*白酶催化BTEE水解,，產(chǎn)物在256nm有特征光吸收；通過測定256nm光吸收增加速率,，來計(jì)算糜*白酶活性,。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測,。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺式離心機(jī)、水浴鍋,、移液器,、微量石英比色皿/ 96孔UV板、研缽/勻漿器,、冰和蒸餾水,。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）1：5-10的比例（建議稱取約0.1g組織,，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,，4℃離心10min,，取上清即粗酶液。

2. 血清（漿）：直接檢測,。

• 測定步驟

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至256nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 試劑一置于25℃水浴中保溫30min,。

3. 樣本測定：

將上述試劑分別加入微量石英比色皿/96孔UV板后充分混勻，于256nm處測定初始吸光值A1和3min時的吸光值A2,，計(jì)算ΔA=A2-A1,。

• 糜*白酶活性計(jì)算公式

1. 按微量石英比色皿計(jì)算：

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：25℃每毫克蛋白每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位,。
糜*白酶活(U/mg prot)=(ΔA×V反總÷ε÷d) ÷(Cpr×V樣)÷T=3.8×ΔA÷Cpr

1. 按樣本質(zhì)量計(jì)算

活性單位定義：25℃每克樣本每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位,。
糜*白酶活(U/g 質(zhì)量)= (ΔA×V反總÷ε÷d) ÷(W×V樣÷V 提取)÷T=3.8×ΔA÷W

1. 按血清（漿）體積計(jì)算

活性單位定義：25℃每毫升血清（漿）每分鐘水解1μmol BTEE為一個酶活單位。
糜*白酶活(U/mL )=(ΔA×V反總÷ε÷d)÷V樣÷T=3.8×ΔA
V樣：加入反應(yīng)體系中粗酶液體積,，0.02mL,；Cpr：粗酶液蛋白濃度，mg/mL,，需要另外測定,；W：樣本質(zhì)量,，g；V反總：反應(yīng)總體積,，0.22mL,；V提取：加入提取液體積,，1mL；T：反應(yīng)時間,，3min,；ε：BTEE消光系數(shù)，0.964mL/μmol/cm,；d：比色皿光徑,，1cm。

1. 按96孔UV板計(jì)算：

將上述計(jì)算公式中的d-1cm改為d-0.6cm（96孔板光徑）進(jìn)行計(jì)算即可,。
注意事項(xiàng)：

1. 當(dāng)ΔA大于0.15或者吸光值大于1時,，建議將樣本用提取液稀釋后測定，注意計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù),。

2. 當(dāng)ΔA小于0.04時,，建議將樣本濃縮或者增加樣本體積進(jìn)行測定，注意計(jì)算公式除以濃縮倍數(shù)或者改變體積,。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

1. 取0.1g兔腎臟加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g，4℃離心10min,，取上清后再用提取液稀釋10倍,，之后按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計(jì)算ΔA=A2-A1=0.9955-0.9192=0.0763,，按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得：糜*白酶活(U/g 質(zhì)量)=3.8×ΔA÷W×10（稀釋倍數(shù)）=28.994 U/g 質(zhì)量,。

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2280/BC2285 酸性*白酶（ACP）活性檢測試劑盒
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糜*白酶活性檢測試劑盒 微量法 糜*白酶活性檢測試劑盒 微量法