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胃*白酶活性檢測
試劑盒說明書
微量法
貨號：BC2325
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入10 mL試劑二,，充分溶解,；

2. 試劑三：臨用前加入10 mL蒸餾水，充分溶解,。

產(chǎn)品說明：
胃*白酶由胃粘膜主細胞分泌,，分解食物中蛋白質(zhì)成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別,，慢性胃炎,、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃*白酶分泌的減少,。
胃*白酶可催化血紅蛋白水解,，水解產(chǎn)物*氨酸在275nm下有特征吸收峰。通過測定吸光值的變化來計算酶活。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀,、臺式離心機,、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔UV板,、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水,。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一,、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）
稱取約0.1g組織加入1mL提取液進行冰浴勻漿或者0.1mL胃液加入0.9mL提取液。10000rpm 4℃離心10分鐘,，取上清,，置冰上待測。
二,、測定步驟

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至275nm，蒸餾水調(diào)零,。

2. 操作表：

注意：對照管后加樣本，而測定管先加樣本

• 胃*白酶活性計算

1. 用微量石英比色皿

1,、按樣本蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位,。
胃*白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（Cpr×V樣本）÷T=0.786×?A÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位,。
胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（W×V樣本÷V提）÷T=0.786×?A÷W
3,、按液體體積計算
活性單位定義：37℃下每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（V樣本÷V提×V液）÷T= 7.86×?A
Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）,，需要另外測定,；W：樣本質(zhì)量，g,；V反總：反應總體積,，0.22mL；V提：粗酶液總體積，1mL,；T：催化反應時間,，10min；V樣本：加入樣本體積,，0.02mL,；V液：液體體積，0.1mL,；ε：*氨酸吸光系數(shù),，1.4μmol^-1·mL·cm^-1；d：光程,，1cm,。
B、用96孔UV板
1,、按樣本蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃下每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位,。
胃*白酶酶活（U/mg prot）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（Cpr×V樣本）÷T = 1.31×?A÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：37℃下每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位,。
胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（W×V樣本÷V提）÷T =1.31×?A÷W
3,、按液體體積計算
活性單位定義：37℃下每毫升液體每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol*氨酸為一個酶活單位。
胃*白酶酶活（U/mL）=（?A÷ε÷d×V反總）÷（V樣本÷V提×V液）÷T =13.1×?A
Cpr：粗酶液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）,，需要另外測定,；W：樣本質(zhì)量，g,；V反總：反應總體積,，0.22mL；V提：粗酶液總體積,，1mL,；T：催化反應時間，10min,；V樣本：加入樣本體積,，0.02mL；V液：液體體積,，0.1mL,；ε：*氨酸吸光系數(shù)，1.4μmol^-1·mL·cm^-1,；d：光程,，0.6cm。
實驗實例：

1. 取0.1g小鼠胃加入1mL提取液充分研磨,，10000rpm 4℃離心10分鐘,，取上清稀釋2倍,，置冰上，按照測定步驟操作,，使用微量石英比色皿測得計算?A=A測定-A對照=1.3345-1.2195=0.115,，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

胃*白酶酶活（U/g 質(zhì)量）=0.786×?A÷W×2（稀釋倍數(shù)）=1.808 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC2280/BC2285 酸性蛋白酶（ACP）活性檢測試劑盒
BC2290/BC2295 中性*白酶（NP）活性檢測試劑

胃*白酶活性檢測試劑盒 微量法 胃*白酶活性檢測試劑盒 微量法