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豚鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒 
貨號(hào)：P4090
規(guī)格：2×200ml/KIT
保存：室溫避光儲(chǔ)存,，有效期少 2 年。

產(chǎn)品組成：
                   名稱(chēng)              規(guī)格
                   試劑 A            200ml
                   紅細(xì)胞裂解液      100ml
                   全血及組織稀釋液  200ml
                   細(xì)胞洗滌液        200ml
 

注意事項(xiàng)：
     A．本實(shí)驗(yàn)要求,，在正常大氣壓下,，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃,。分離液在低溫時(shí)呈較高密度,，在高溫時(shí)呈較低密度。細(xì)胞分離液從冰箱取出后,，不可立即使用,，操作前可將樣本和分離液復(fù)溫18-22℃。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,，好在取血后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，血液提取后存放時(shí)間越長(zhǎng)細(xì)胞活性越低。
    B．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,，如需稀釋血液或洗滌細(xì)胞,，不可使用含Ca 2+ 、Mg 2+ 離子的緩沖液及培養(yǎng)液,，其成分會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞凝集,，大大降低細(xì)胞得率及純度。
    C．優(yōu)抗凝劑選擇：EDTA,、枸櫞酸,、肝素。注意在血液稀釋過(guò)程中去除抗凝劑體積,。
    D．好使用無(wú)靜電反應(yīng)的離心管,，推薦使用未經(jīng)過(guò)堿處理的玻璃離心管。
    E．由于各品牌離心機(jī)的性能不同,，國(guó)內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時(shí)間,，摸索的分離條件（具體分離條件各實(shí)驗(yàn)室自定）,。
 

分離方法 ：
    1. 取1ml新鮮抗凝血，與全血及組織稀釋液1:1 混勻后小心加于1份A液之液面上,；
    2. 以500g（約1800轉(zhuǎn)/分）離心25分鐘(半徑15cm水平轉(zhuǎn)子),。
    3. 此時(shí)離心管中由上下細(xì)胞分四層。*層：為血漿層,。第二層：為環(huán)狀乳白色的單個(gè)核細(xì)胞層,。
    第三層：為略帶混濁的分離液層（富集一定量的中性粒細(xì)胞）。第四層：為紅細(xì)胞層,。棄去*層血漿層及第二層細(xì)胞,，收集第三層分離液層和第四層紅細(xì)胞層，放入含細(xì)胞洗滌液10ml的試管中，充分混勻后，以500g約（1800轉(zhuǎn)/分）離心30分鐘,。沉淀經(jīng)1次洗滌后用紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞,，再經(jīng)3次洗滌去除紅細(xì)胞內(nèi)溶物和碎片后取沉淀細(xì)胞即為所需中性粒細(xì)胞。
    注：A. 提取率約為80%,。
    B. 紅細(xì)胞裂解過(guò)程詳見(jiàn)“紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明”。

紅細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明 ：
    本公司紅細(xì)胞裂解液在裂解紅細(xì)胞的同時(shí)不損傷并在一定程度上保護(hù)淋巴細(xì)胞(lymphocyte)或其它有細(xì)胞核的細(xì)胞，所獲得的細(xì)胞可保持完好的生物活性和完整的細(xì)胞形態(tài),。另外，本裂解液中無(wú)DNA及RNA酶,，配合細(xì)胞分離液使用所提細(xì)胞可廣泛用于細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),。
    紅細(xì)胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer),，也稱(chēng)ACK Lysis Buffer，是一種用于從人或鼠等的血液或組織細(xì)胞樣品中裂解并去除無(wú)細(xì)胞核紅細(xì)胞的溶液,。
    本裂解液不適用于有細(xì)胞核紅細(xì)胞的裂解,，例如鳥(niǎo)或禽類(lèi)的紅細(xì)胞。本裂解液經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理,，處理過(guò)的血液或組織細(xì)胞樣品可以用于后續(xù)的原代培養(yǎng),、細(xì)胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測(cè)。

使用說(shuō)明：
    A.  對(duì)于組織細(xì)胞樣品：
    a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,，通過(guò)適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,，離心棄上清。
    b. 加入3-5倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,，輕輕吹打混勻,，裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml,，則加入3-5ml的紅細(xì)胞裂解液,。本步驟在室溫或4度操作均可。
    c. 400-500g離心5分鐘,，棄紅色上清,。4℃離心效果更佳。
    d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次,。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè)。
    e. 洗滌1-2次：加入適量PBS,、HBSS,、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液，重懸沉淀,，400-500g離心2-3分鐘,，棄上清?？稍僦貜?fù)1次,，共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應(yīng)少為細(xì)胞沉淀體積的5倍,。4℃離心效果更佳,。
    f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
    B.  對(duì)于組織細(xì)胞樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟：
    a. 新鮮組織經(jīng)過(guò)膠原酶或胰酶等消化處理,，通過(guò)適當(dāng)方法分散成細(xì)胞懸液,，離心棄上清。
    b. 對(duì)于0.2ml細(xì)胞沉淀加入1ml紅細(xì)胞裂解液,，輕輕吹打混勻,，裂解1-2分鐘,。本步驟在室溫或4度操作均可。
    c. 加入15-20ml PBS,、HBSS,、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液,，混勻,。
    d. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清,。4℃離心效果更佳,。
    e. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次,。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè),。
    f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
注：對(duì)于常規(guī)步驟,，多一步洗滌過(guò)程中的離心,，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些,，同時(shí)不需要大體積的離心管,。快速步驟少了一次離心,，但洗滌效果略差一些,，同時(shí)需要大體積的離心管。
    C.  對(duì)于血液樣品：
    a. 取新鮮抗凝血,，400-500g離心5分鐘,，離心棄上清。
    b. 加入6-10倍細(xì)胞體積的紅細(xì)胞裂解液,，輕輕吹打混勻,，裂解1-2分鐘。例如細(xì)胞沉淀的體積為1ml,，則加入6-10ml的紅細(xì)胞裂解液,。 本步驟在室溫或4度操作均可。 注意： 對(duì)于鼠的血液,， 裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,，對(duì)于人的外周血，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間4-5分鐘,，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。
   c. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清,。4℃離心效果更佳,。
   d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*,，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè),。
   e. 洗滌1-2次：加入適量PBS,、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液,，重懸沉淀,，400-500g離心2-3分鐘，棄上清,?？稍僦貜?fù)1次，共洗滌1-2次,。洗滌液的用量通常應(yīng)少為細(xì)胞沉淀體積的5倍,。4℃離心效果更佳。
   f. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn),。
注：對(duì)于微量或少量的血液樣品,，可以在*步中不進(jìn)行離心棄上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液體積的紅細(xì)胞裂解液,，并在室溫或4℃裂解4-5分鐘,。對(duì)于鼠的血液，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,，對(duì)于人的外周血,，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間10分鐘，但通常不宜超過(guò)15分鐘,，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。后續(xù)步驟相同。
   D.  對(duì)于血液樣品無(wú)需洗滌的快速操作步驟：
   a. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細(xì)胞裂解液,，輕輕吹打混勻,，裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可,。注意：對(duì)于鼠的血液,，裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠，對(duì)于人的外周血,，宜延長(zhǎng)裂解時(shí)間10分鐘,，但通常不宜超過(guò)15分鐘，并且裂解過(guò)程中宜適當(dāng)偶爾搖動(dòng)以促進(jìn)紅細(xì)胞裂解,。
   b. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液,，混勻,。
   c. 400-500g離心5分鐘，棄紅色上清,。4℃離心效果更佳,。
   d. 如果發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞裂解不*，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次,。通常極微量的紅細(xì)胞不會(huì)影響后續(xù)的一些檢測(cè),。
   e. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用適當(dāng)溶液重懸細(xì)胞沉淀后即可進(jìn)行計(jì)數(shù)等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
      注：對(duì)于常規(guī)步驟,，多一步洗滌過(guò)程的離心,，但可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好一些,，同時(shí)不需要大體積的離心管?？焖俨襟E少了一次離心,，但洗滌效果略差一些，同時(shí)需要大體積的離心管,。

產(chǎn)品性能指標(biāo) ：

pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
無(wú)菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10µm 以上的不溶性微粒20 粒以下,，
含25µm 以上的不溶性微粒5 粒以下

貯藏及保存期限 ：
    本分離液是敏光型的，應(yīng)在18℃-25℃避光保存,，有效期兩年,。啟封后置4℃保存，有效期一周,，若保證無(wú)微生物污染,，啟封后可置4℃長(zhǎng)期保存。未啟封前保存溫度較低（10℃以下）時(shí)分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,，影響分離效果,。

豚鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液試劑盒訂購(gòu)說(shuō)明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨,。 
2、部分非常用產(chǎn)品,，需提前1－2日預(yù)訂,，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。 
3,、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期,、批次等因素發(fā)生變化，若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。 
4,、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨,。
5,、請(qǐng)辦理完貨款后，將收據(jù),、底單等連同收貨人的地址,、姓名、等以傳真,、,、短信、等形式通知我們,。

運(yùn)輸說(shuō)明：

1,、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái),，再用泡沫盒密封,，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子,，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航,。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸,。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái),，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周）,，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中,，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3,、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝,。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中,。