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NAD-蘋果酸酶（NAD-ME）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號: BC1135
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前加入10 mL提取液充分溶解備用,；

2. 試劑三：臨用前每支加1 mL雙蒸水充分溶解備用,；

3. 試劑四：用時每支加500 μL雙蒸水充分溶解備用,；

4. 工作液：在7.5 mL試劑二中加入1 mL試劑三和0.5 mL試劑四，可以根據(jù)比例現(xiàn)用現(xiàn)配,。

產(chǎn)品說明：
ME廣泛存在于微生物,、培養(yǎng)細(xì)胞、動物和植物胞漿中,，尤其在植物組織中活性較高,。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙 酮酸和CO₂,，以及伴隨NAD(P)⁺的還原反應(yīng),，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān),。近年來植物ME活性測定較多,，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同,，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40),。
NAD-ME催化NAD⁺還原成NADH，在340nm下測定NADH增加速率,。

注意：實(shí)驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀,、低溫離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器,、微量石英比色皿/96孔UV板,、研缽/勻漿器、蒸餾水,。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 若A2-A1大于0.5,，需將樣本用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5,，可提高檢測靈敏度,。

2. 實(shí)驗時，樣本在冰上放置,，以免變性和失活,。試劑一37℃或25℃水浴放置。

3. 比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃,，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水,，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。用96孔板做時盡量保持反應(yīng)溫度在37℃或25℃,。

4. 最好兩個人同時做此實(shí)驗,，一個人比色，一個人計時,，以保證實(shí)驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,。用96孔板做時盡量做到樣本反應(yīng)時間一致。

5. 如果ΔA＜0.01,，可將反應(yīng)時間延長到10分鐘,。

實(shí)驗實(shí)例：

1. 取0.1g肝加入1mL提取液進(jìn)行勻漿研磨，取上清,，按照測定步驟操作,，使用微量石英比色皿測得計算ΔA=A2-A1=0.893-0.6814=0.2116，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

NAD-ME（U/g 質(zhì)量）=965×ΔA÷W=965×0.2116÷0.1=2041.94 U/g 質(zhì)量,。
參考文獻(xiàn)：

1. Spampinato C P, Colombo S L, Andreo C S. Interaction of analogues of substrate with NADP-malic enzyme from maize leaves[J]. Photosynthesis research, 1994, 39(1): 67-73.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0310/BC0315 輔酶Ⅰ NAD（H）含量檢測試劑盒
BC1030/BC1035 NAD激酶（NADK）活性檢測試劑盒
BC0630/BC0635 NADH氧化酶（NOX）活性檢測試劑盒
 

NAD-蘋果酸酶活性檢測試劑盒 微量法 NAD-蘋果酸酶活性檢測試劑盒 微量法