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牛骨髓單個核細(xì)胞分離液試劑盒
貨號：P5130
規(guī)格：200ml/kit
保存：室溫避光儲存，有效期少 2 年,。

試劑盒內(nèi)容：

全血及組織稀釋液 100ml
細(xì)胞洗滌液 100ml
試劑C 100ml
試劑E 100ml
試劑F 100ml
說明書 1 份

一,、  各種動物骨髓細(xì)胞的采集方法
    1. 大鼠,、小鼠骨髓的采集：用頸椎脫臼法處死動物,，剝離出胸骨或股骨,，用注射器吸取少量的F 液，沖洗出胸骨或股骨中全部骨髓液,，以500g（約1800 轉(zhuǎn)/分）離心20 分鐘,，棄上清。沉淀以F 液重復(fù)洗滌一次后用含20%胎牛血清的全血及組織稀釋液懸起（細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml）,，備用,。
   2. 大動物骨髓的采集：
    A．骨髓穿刺點定位
   （1）胸骨：穿刺部位在胸骨中線,胸骨體與胸骨柄連接處，或選胸骨上1/3 部,。
   （2）脛骨：穿刺部位在脛骨內(nèi)側(cè),脛骨上端的下方1 厘米處。
   （3）肋骨：穿刺部位在第5～7 肋骨各自的中點上,。
   （4）髁骨：穿刺部位在髁前上棘后2～3 厘米的髁嵴,。
   （5）股骨：穿刺部位在股骨內(nèi)側(cè)面,靠下端的凹面處。
 

B．骨髓穿刺方法
   （1）實驗動物按要求固定,，穿刺部位去毛,、消毒、麻醉,，要求局部麻醉范圍直達(dá)骨膜,，也可作全麻。
   （2）操作人員帶消毒手套,，確定穿刺點,，估計從皮膚到骨髓的距離并依此固定骨髓穿刺針長度。左手拇,、食指繃緊穿刺點周圍皮膚,，右手持穿刺針在穿刺點垂直進針，小弧度左右旋轉(zhuǎn)鉆入,，當(dāng)有落空感時表示針尖已進入骨髓腔,。用左手固定穿刺針,，右手抽出針芯，連接注射器緩慢抽吸骨髓組織,，當(dāng)注射器內(nèi)抽到少許骨髓時立即停止抽吸,，收集骨髓細(xì)胞加入4-5ml F 液混勻，以500g（約1800 轉(zhuǎn)/分）離心20 分鐘,，棄上清,，沉淀以F 液重復(fù)洗滌兩次后用含20%胎牛血清的全血及組織稀釋液懸起（細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml），備用,。
   （3）左手壓住穿刺點周圍皮膚,，迅速拔出穿刺針，用棉球壓迫數(shù)分鐘,。如穿刺的是肋骨,，除壓迫止血外，還需膠布封貼穿刺點,，防止發(fā)生氣胸,。
 

3. 人骨髓的采集：
   臨床方法收集骨髓細(xì)胞加入4-5ml F液混勻，以500g（約1800轉(zhuǎn)/分）離心20分鐘,，棄上清,，沉淀以F液重復(fù)洗滌兩次后用含20%胎牛血清的全血及組織稀釋液懸起（細(xì)胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml），備用,。

二,、骨髓淋巴細(xì)胞分離方法
    1．取1ml 骨髓細(xì)胞懸液與E液按1:1比例混合再與1份全血及組織稀釋液混勻置20℃-30℃下自然沉降20-30分鐘。吸取渾濁的上清部分,，棄去底部紅細(xì)胞備用,。
    2. 取渾濁的上清部分液體小心疊加在C 液之液面上（比例為1：1），20℃±2℃,，400g（約1500 轉(zhuǎn)/分）,，離心20 分鐘（半徑15cm 水平轉(zhuǎn)子）。
     此時離心管中由上下細(xì)胞分四層,。*層;為稀釋液層,。第二層；為環(huán)狀乳白色含所需單個核細(xì)胞層,。
     第三層,；為透明分離液層。第四層,；為極少紅細(xì)胞層,。收集第二層細(xì)胞放入含細(xì)胞洗滌液4-5 毫升的試管中，充分混勻后,，以500g（約1800 轉(zhuǎn)/分）離心20 分鐘,。沉淀經(jīng)反復(fù)洗滌2 次即得所需單個核細(xì)胞,。
    注： 提取率約為80%。
    分離圖例：

三,、  注意事項
     A． 本分離液是敏光型的,，在運輸和貯藏過程中應(yīng)在18℃-25℃避光保存，啟封后置4℃保存避免微生物污染,。另外,，本品為真空包裝，未啟封前置于10℃ 以下易出現(xiàn)白色結(jié)晶,，影響分離效果,。
    B． 待分離的骨髓要求新鮮，避免冷凍和冷藏,。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復(fù)溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好,，且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
    C． 由于各品牌離心機的性能不同,，國內(nèi)南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異,，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù),，調(diào)節(jié)離心的時間,，摸索的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。
    D． 好使用無靜電反應(yīng)的離心管,，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管,。

四、產(chǎn)品性能指標(biāo)

pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內(nèi)毒素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養(yǎng)14 天后培養(yǎng)基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下,，
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下

五,、貯藏及保存期限
    18℃-25℃避光保存，有效期兩年,。啟封后置4℃保存，有效期一周,。
    注：若保證無微生物污染,，啟封后可置4℃長期保存。但應(yīng)注意保存溫度較低時本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,，影響分離效果,。

牛骨髓單個核細(xì)胞分離液試劑盒訂購說明：

1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨,。 
2、部分非常用產(chǎn)品,，需提前1－2日預(yù)訂,，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂,。 
3、部分產(chǎn)品價格會因貨期,、批次等因素發(fā)生變化,，若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn)。 
4,、每日訂單截止時間為16點整,，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨,。
5,、請辦理完貨款后，將收據(jù),、底單等連同收貨人的地址,、姓名、等以傳真,、,、短信、等形式通知我們,。

運輸說明：

1,、極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來,，再用泡沫盒密封,，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子,，然后交付給合作快遞,，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實驗保駕護航,。
2、低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸,。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來,，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實密封泡沫盒,，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周）,，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中,，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,，為您的實驗保駕護航。
3,、常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝,。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨,，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。