目錄:北京索萊寶科技有限公司>>免疫學(xué)>>ELISA試劑盒>> SEKH-0185人半乳糖凝集素-3 ELISA試劑盒
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T/48T |
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貨號 | SEKH-0185 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
主要用途 | 人Galectin-3含量測定 |
人半乳糖凝集素-3 ELISA試劑盒
注意事項:
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,,請不要使用過期的試劑,。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標準品,,請丟棄,。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品,。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復(fù)孔檢測,,且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
5. 為避免交叉污染,,請在試驗中使用 1 次性試管,,槍頭,封板膜(※)及潔凈塑料容器,。.
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上, 使用前請離心處理(5-10 S 即可),,使管壁上的液體集中在管底部,,取用時,請用移液器小心吹打幾次,。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的 試劑代替本試劑盒中的某單個組分,。
8. 為保證結(jié)果準確,,每次檢測均需做標準曲線。
安全提示:
試劑盒中的終止液為酸性溶液,,操作人員在使用時請帶上手套并注意防護,;在操作過程中也要避免試 劑接觸皮膚和眼睛,如果不慎接觸,,請用大量清水清洗,;檢測血液樣本及其它體液樣本時,請按國家生物 實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行,。
自備實驗器材(不提供,,可代購)
1. 酶標儀(主波長 450nm,參考波長 630nm)
2. 高精度移液器及一次性吸頭:0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3. 洗板機或洗瓶
4. 37℃孵育箱
5. 雙蒸水,,去離子水,,量筒等
6. 稀釋用聚丙烯試管
人半乳糖凝集素-3 ELISA試劑盒
樣本收集及儲存:
1. 細胞培養(yǎng)上清: 將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,,在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并 于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),避免反復(fù)凍融,。
2. 血清樣本: 室溫血液自然凝固 20 min 后,,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于 -20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),,保存過程中如有沉淀,,請再次離心,避免反復(fù)凍融,。
3. 血漿樣本: 將全血收集到含抗血凝劑的管中,,根據(jù)標本的實際要求選擇 EDTA,檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,,混 合 20 min,,在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存(24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存),,避免反復(fù)凍融,。
※注意:
血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,,以免影響檢測結(jié)果,;如果樣本中的靶標物檢測濃度高 于標準品的值,請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,,建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù),。
試劑準備:
1. 試劑回溫:首先在實驗前 30 min 將試劑盒,待測樣本放置于室溫下,,濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,,請放入 37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。
2. 配制洗滌液:預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,,然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋 成 1 倍應(yīng)用液,,未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標準品梯度稀釋:加入標準品/樣本稀釋液(SR1)1ml凍干標準品中,,靜置15分鐘待其*溶解后輕 輕混勻(濃度為4000pg/ml),,然后按照以下濃度進行2倍稀釋:4000、2000,、1000,、500、250,、125,、62.5pg/ml 進行稀釋,4000pg/ml為標準曲線點濃度,,標準品/樣本稀釋液(SR1)作為標準曲線的零點(0pg/ml),。 復(fù)溶過的標準品原液(4000pg/ml)未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,,并將其貯存在-20~ -80℃冰箱,具體如下圖,。
4. 生物素化抗體工作液:預(yù)先計算好試驗所需用量,,用檢測稀釋液(SR2)將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍 應(yīng)用工作液(稀釋前充分混勻),請在30分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中,。
5. 酶結(jié)合物工作液:按每次試驗所需用量配制,,用酶結(jié)合物稀釋液(SR3)將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1 倍應(yīng)用工作液(稀釋前離心),請在30分鐘內(nèi)使用,。
6. 洗滌方法:
? 自動洗板:甩盡酶標板孔中液體,,在厚迭吸水紙上拍干,注入洗滌液為 300ul/孔,,注 與吸出間隔為 30 秒,,洗板 5 次。
? 手工洗板:甩盡酶標板孔中液體,,在厚迭吸水紙上拍干,,用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,靜止 30 秒后甩凈酶標板孔中液體,,在厚迭的吸水紙上拍干,,洗板 5 次。
Galectin-3 Human ELISA Kit
結(jié)果判斷:
1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值,。選擇雙波長檢測,,參考波長為 630 nm。如不能進行雙波長檢測,,請 用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值,。
2.計算標準品、樣品的平均 OD 值:每個標準品和標本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值,。
3.以標準品濃度為橫坐標,,吸光度OD值為縱坐標,用軟件繪制標準曲線,,樣品中Galectin-3含量可通過對應(yīng) OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度。
4.若標本 OD 值高于標準曲線上限,,應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,,計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù)
2. 靈敏度:
低可檢測人 Galectin-3 濃度達 31pg/ml, 20 個零標準品濃度 OD 的平均值加上兩個標準差,,計算相應(yīng)的可檢測濃度,。
3. 特異性:
不與人 Galectin-1、Galectin-2 ,、Galectin-4,、Galectin-7 ,、Galectin-8、Galectin-9,、Galectin-10 ,、Galectin-14、 MAC-2BP,,小鼠 Galectin-1 ,、Galectin-2 、Galectin-7,、MAC-2BP 等反應(yīng),。
4. 重復(fù)性:
板內(nèi),板間變異系數(shù)<10%,。
5. 回收率:
在選取的健康人血漿,、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的人 Galectin-3,計算回收率,。
6. 線性稀釋: 分別在選取的 4 份健康人血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度人 Galectin-3,,在標準曲線動力學(xué)范圍內(nèi)進行稀 釋,評估線性,。
人半乳糖凝集素-3酶聯(lián)免疫試劑盒