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人成纖維細胞生長因子21ELISA試劑盒

注意事項：
 1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,，請不要使用過期的試劑,。

2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準品,，請丟棄,。

3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品,。

4. 在試驗中標(biāo)準品和樣本建議作復(fù)孔檢測,，且加入試劑的順序應(yīng)保持*。

5. 為避免交叉污染,，請在試驗中使用 1 次性試管,，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器,。

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶 蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可）,，使管壁上的液體集中在管底部,，取用時，請用移液器小心吹 打幾次,。

7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的 試劑代替本試劑盒中的某單個組分。

8. 為保證結(jié)果準確,，每次檢測均需做標(biāo)準曲線,。 

安全提示： 
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護,；在操作過程中也要避免試 劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸,，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時,，請按國家生物 實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行,。

自備實驗器材（不提供，可代購）
 1． 酶標(biāo)儀（主波長 450nm,，參考波長 630nm）

2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3． 洗板機或洗瓶

4． 37℃孵育箱

5． 雙蒸水，去離子水,，量筒等

6． 稀釋用聚丙烯試管

人成纖維細胞生長因子21ELISA試劑盒

樣本收集及儲存：

1. 細胞培養(yǎng)上清： 將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并 于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融,。

2. 血清樣本： 室溫血液自然凝固 20 min 后,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于 -20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，保存過程中如有沉淀,，請再次離心，避免反復(fù)凍融,。

3. 血漿樣本： 將全血收集到含抗血凝劑的管中,，根據(jù)標(biāo)本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混 合 20 min,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，避免反復(fù)凍融,。

 ※注意：
血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,，以免影響檢測結(jié)果,；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高 于標(biāo)準品的值，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,，建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù),。

 試劑準備：
 1. 試劑回溫：首先在實驗前 30 min 將試劑盒，待測樣本放置于室溫下,，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,，請放入 37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。

2. 配制洗滌液：預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋 成 1 倍應(yīng)用液,，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。

3. 標(biāo)準品梯度稀釋：加入標(biāo)準品/樣本稀釋液（SR1）1ml凍干標(biāo)準品中,，靜置15分鐘待其*溶解后輕 輕混勻(濃度為2000pg/ml),，然后在其余七管中各加入500?L標(biāo)準品/樣本稀釋液（SR1）,，按照以下濃度 進行2倍稀釋：2000、1000,、500,、250、125,、62.5,、31.25、0 pg/ml進行稀釋,。2000pg/ml為標(biāo)準曲線 高點濃度,，標(biāo)準品/樣本稀釋液（SR1）作為標(biāo)準曲線的零點（0pg/ml）。復(fù)溶過的標(biāo)準品原液（2000pg/ml） 未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,，并將其貯存在-20～-80℃冰箱,，具體如下圖。

 

4. 生物素化抗體工作液：預(yù)先計算好試驗所需用量,，用檢測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍 應(yīng)用工作液（稀釋前充分混勻）,，請在30分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。

5. 酶結(jié)合物工作液：按每次試驗所需用量配制,，用酶結(jié)合物稀釋液（SR3）將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1 倍應(yīng)用工作液（稀釋前離心）,，請在30分鐘內(nèi)使用。

6. 洗滌方法：

? 自動洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干,，注入洗滌液為 300ul/孔,注入與吸出 間隔為 30 秒，洗板 5 次,。

?手工洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干，用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,，靜止 30 秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體,，在厚迭的吸水紙上拍干，洗板 5 次,。

人成纖維細胞生長因子21

結(jié)果判斷：

1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定 OD 值,。選擇雙波長檢測，參考波長為 630 nm,。如不能進行雙波長檢測,，請 用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。

2.計算標(biāo)準品,、樣品的平均 OD 值：每個標(biāo)準品和標(biāo)本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值

3.以標(biāo)準品濃度為橫坐標(biāo),，吸光度OD值為縱坐標(biāo)，用軟件繪制標(biāo)準曲線,，樣品中FGF-21含量可通過對應(yīng)OD 值由標(biāo)準曲線換算出相應(yīng)的濃度,。 4.若標(biāo)本 OD 值高于標(biāo)準曲線上限,，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù),。

2. 靈敏度： 低可檢測人 FGF-21 濃度達 15pg/ml,， 20 個零標(biāo)準品濃度 OD 的平均值加上兩個標(biāo)準差，計算相應(yīng)的可檢測濃度,。

3. 特異性： 不與人 FGF-3,、FGF-4、FGF5,、FGF-6,、FGF-9、FGF-10,、FGF-12、FGF-16,、FGF-17,、FGF-18、FGF-19,、 FGF-20,、FGF-22、FGF-23,、KGF,、EGF、MSP 反應(yīng),，小鼠 FGF-8b,、FGF-8c、FGF-23 反應(yīng).
 

4. 重復(fù)性： 板內(nèi),，板間變異系數(shù)<10%,。

5. 回收率： 在選取的健康人血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的人 FGF-21,，計算回收率,。

6. 線性稀釋： 分別在選取的 4 份健康人血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度人 FGF-21，在標(biāo)準曲線動力學(xué)范圍內(nèi)進行稀 釋,，評估線性,。

人成纖維細胞生長因子21酶聯(lián)免疫試劑盒