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大鼠白介素10（Rat IL-10）ELISA試劑盒

注意事項：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,，請不要使用過期的試劑。

2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,，請丟棄。

3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min,，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品,。

4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持*,。

5. 為避免交叉污染,，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭,，封板膜（※）及潔凈塑料容器,。.

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,，使用前請離心處理（5-10 S 即可）,，使管壁上的液體集中在管底部，取用時,，請用移液器小心吹打幾次。

7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分,。8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

安全提示：試劑盒中的終止液為酸性溶液,，操作大鼠員在使用時請帶上手套并注意防護,；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛，如果不慎接觸,，請用大量清水清洗,；檢測血液樣本及其它體液樣本時，請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行,。

自備實驗器材（不提供,，可代購）

1． 酶標(biāo)儀（主波長 450nm，參考波長 630nm）

2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3． 洗板機或洗瓶

4． 37℃孵育箱

5． 雙蒸水,，去離子水,，量筒等

6． 稀釋用聚丙烯試管

大鼠白介素10（Rat IL-10）ELISA試劑盒

樣本收集及儲存：

1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，避免反復(fù)凍融,。

2. 血清樣本：室溫血液自然凝固 20 min 后，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，保存過程中如有沉淀，請再次離心,，避免反復(fù)凍融,。

3. 血漿樣本：將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實際要求選擇 EDTA,，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合 20 min，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，避免反復(fù)凍融。

※注意：血清血漿樣本避免使用溶血,、高血脂樣本,，以免影響檢測結(jié)果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的值,，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,，建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù)。

試劑準(zhǔn)備：

1. 試劑回溫：首先在實驗前 30 min 將試劑盒,，待測樣本放置于室溫下,，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,，請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。

2. 配制洗滌液：預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。

3.標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）1000?L凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,，靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為,、2000pg/ml)，按照以下濃度進行2倍稀釋：2000,、1000,、500、250,、125,、62.5、31.25,、0pg/ml進行稀釋,。2000pg/ml作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的點濃度，標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零點（0pg/ml）,。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液（2000pg/ml）未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,，并將其貯存在-20～-80℃冰箱，具體如下圖,。

5.洗滌方法：

? 自動洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干，注入洗滌液為 300ul/孔,注與吸出間隔為 30 秒,，洗板 5 次,。

? 手工洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干,，用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,，靜止 30秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭的吸水紙上拍干,，洗板 5 次,。

IL-10酶聯(lián)免疫試劑盒

結(jié)果判斷：

?1.用酶標(biāo)儀 450 nm 波長測定 OD 值。選擇雙波長檢測,，參考波長為 630 nm,。如不能進行雙波長檢測，請用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值,。

2.計算標(biāo)準(zhǔn)品,、樣品的平均 OD 值：每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值

3.以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度OD值為縱坐標(biāo),，用軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，樣品中含量可通過對應(yīng)OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

4.若標(biāo)本 OD 值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù),。

2. 靈敏度：

低可檢測大鼠濃度達 15pg/ml,，20 個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩個標(biāo)準(zhǔn)差,，計算相應(yīng)的可檢測濃度。

3. 特異性：

不與大鼠 GM-CSF,、IL-1α,、IL-1β、IL-2,、IL-4,、IL-6、TNF-α,、PDGF-BB,、β-NGF 、人的 IL-10,、 IL-10R 反應(yīng),。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)，板間變異系數(shù)<10%,。

IL-10 ELISA KIT（Rat）