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人基質(zhì)金屬蛋白酶10( MMP-10)ELISA試劑盒

注意事項：

?1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,，請不要使用過期的試劑,。

2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄,。

3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30min,，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。

4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,，且加入試劑的順序應(yīng)保持*,。

5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管,，槍頭,，封板膜（※）及潔凈塑料容器。.

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部,，取用時,，請用移液器小心吹打幾次。

7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分,。

8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

安全提示：試劑盒中的終止液為酸性溶液,，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護(hù)；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸,，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時,，請按國家生物實驗室安全防護(hù)有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行,。

自備實驗器材（不提供，可代購）

1． 酶標(biāo)儀（主波長 450nm,，參考波長 630nm）

2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3． 洗板機(jī)或洗瓶

4． 37℃孵育箱

5． 雙蒸水,，去離子水，量筒等

6． 稀釋用聚丙烯試管

人基質(zhì)金屬蛋白酶10( MMP-10)ELISA試劑盒

樣本收集及儲存：

1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管,，在 4℃條件下 1000 ×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，避免反復(fù)凍融。

2. 血清樣本：室溫血液自然凝固 20 min 后,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀,，請再次離心,，避免反復(fù)凍融,。

3. 血漿樣本：將全血收集到含抗血凝劑的管中，根據(jù)標(biāo)本的實際要求選擇 EDTA,，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合 20 min，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，避免反復(fù)凍融。

※注意：血清血漿樣本避免使用溶血,、高血脂樣本,，以免影響檢測結(jié)果；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的值,，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,，建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù),。

試劑準(zhǔn)備：

?1. 試劑回溫：首先在實驗前 30 min 將試劑盒,，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,，請放入37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解,。

2. 配制洗滌液：預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存,。

3.標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）1ml凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為2000pg/ml),，然后按照以下濃度進(jìn)行2倍稀釋：1000,、500、250,、125,、62.5、31.25,、15.625pg/ml進(jìn)行稀釋,，1000pg/ml為標(biāo)準(zhǔn)曲線點濃度，標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的零點（0pg/ml）,。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液（2000pg/ml）未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,，并將其貯存在-20～-80℃冰箱，具體如下圖,。

6.洗滌方法：

? 自動洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干，注入洗滌液為 300ul/孔,，注與吸出間隔為 30 秒,，洗板 5 次,。

? 手工洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干,，用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,，靜止 30秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體，在厚迭的吸水紙上拍干,，洗板 5 次,。

2. 靈敏度：

低可檢測人 MMP-10 濃度達(dá) 8 pg/ml，20 個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩個標(biāo)準(zhǔn)差,，計算相應(yīng)的可檢測濃度,。

3. 特異性：

不與人 MCP-1、MMP-1,、MMP-2,、MMP-3、MMP-7,、MMP-8,、MMP-9、MMP-12,、MMP-13,，小鼠 IFN-γ、IL-1β,、IL-2,、IL-4、IL-6,、IL-10,、IL-17A、TNF-α 等反應(yīng),。

4. 重復(fù)性：板內(nèi),，板間變異系數(shù)<10%。

MMP-10 Human ELISA Kit