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小鼠白介素21（ IL-21）ELISA試劑盒

注意事項：※※※

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,，請不要使用過期的試劑,。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,，請丟棄,。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品,。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,，且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
5. 為避免交叉污染,，請在試驗中使用 1 次性試管,，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器,。.
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可）,，使管壁上的液體集中在管底部,，取用時，請用移液器小心吹打幾次,。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

安全提示：

試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護,；在操
作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸，請用大量清水清洗,；檢測血液樣本及其它體液樣本時,，請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
 

試劑盒組成及儲存：

自備實驗器材（不提供,，可代購）
1． 酶標(biāo)儀（主波長 450nm,，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水,，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管

小鼠白介素21（ IL-21）ELISA試劑盒

樣本收集及儲存：
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：
將細(xì)胞培養(yǎng)基移無菌離心管,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融。
2. 血清樣本：
室溫血液自然凝固 20 min 后,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀,，請再次離心,，避免反復(fù)凍融。
3. 血漿樣本：
將全血收集到含抗血凝劑的管中,，根據(jù)標(biāo)本的實際要求選擇 EDTA,，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合 20 min,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，避免反復(fù)凍融,。
 

※注意：血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,，以免影響檢測結(jié)果,；如果樣本中的靶標(biāo)物檢測濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品的值，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測,，建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù),。
 

試劑準(zhǔn)備：
1. 試劑回溫：首先在實驗前 30 min 將試劑盒，待測樣本放置于室溫下,，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,，請放入 37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解。
2. 配制洗滌液：預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積,，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本稀釋液（SR1）1ml凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,，靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為4000pg/ml),，然后按照以下濃度：4000、2000,、1000,、500、 250,、125,、62.5、 0 pg/ml進行稀釋,。復(fù)溶過的標(biāo)準(zhǔn)品原液（4000pg/ml）未用完的應(yīng)廢 棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,，并將其貯存在-20～-80℃冰箱，具體如下圖。

4. 生物素化抗體工作液：預(yù)先計算好試驗所需用量,，用檢測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應(yīng)用工作液（稀釋前充分混勻）,，請在30分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中。

5. 酶結(jié)合物工作液：按每次試驗所需用量配制,，用酶結(jié)合物稀釋液（SR3）將100倍濃縮酶結(jié)合物稀釋成1倍應(yīng)用工作液（稀釋前離心）,，請在30分鐘內(nèi)使用。

6. 洗滌方法：
? 自動洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干,，注入洗滌液為 300ul/
孔,注與吸出間隔為 30 秒，洗板 5 次,。
? 手工洗板：甩盡酶標(biāo)板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干，用洗瓶加入洗滌液
300ul/孔,，靜止 30 秒后甩凈酶標(biāo)板孔中液體,，在厚迭的吸水紙上拍干，洗板 5 次,。



參數(shù)表征：

1. 數(shù)據(jù)及標(biāo)準(zhǔn)曲線

本圖僅供參考,，應(yīng)以當(dāng)次試驗標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算小鼠 IL-21 的樣本含量


2. 靈敏度：
低可檢測小鼠 IL-21濃度達30pg/ml，20 個零標(biāo)準(zhǔn)品濃度 OD 的平均值加上兩個標(biāo)準(zhǔn)差,，計算相應(yīng)的可檢測濃度,。
 

3. 特異性：
不與小鼠 G-CSF、GM-CSF,、IL-1a,、IL-2、3,、5,、7、10 反應(yīng),，大鼠 IL-4,、IL-4Ra 等反應(yīng)
 

4. 重復(fù)性：板內(nèi)，板間變異系數(shù)<10%

5. 回收率：
在選取的健康小鼠血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的小鼠 IL-21,，計算回收率。

6. 線性稀釋：
分別在選取的 4 份健康小鼠血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 IL-21,，在標(biāo)準(zhǔn)曲線動力學(xué)范圍內(nèi)進行稀釋,，評估線性。