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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T/48T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | SEKM-0127 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
| 主要用途 | 小鼠P-selectin含量測定 |
小鼠P選擇素（P-selectin）ELISA試劑盒
注意事項：※※※
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑,。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,，已復(fù)溶但未用完的標準品，請丟棄,。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min,，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品,。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持*。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管,，槍頭,，封板膜（※）及潔凈塑料容器。.
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部,，取用時，請用移液器小心吹打幾次,。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準確,，每次檢測均需做標準曲線,。
安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護,；在操作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸，請用大量清水清洗,；檢測血液樣本及其它體液樣本時,，請按國家生物實驗室安全防護有關(guān)管理規(guī)定執(zhí)行。
自備實驗器材（不提供,，可代購）
1． 酶標儀（主波長 450nm,，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水,，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管
小鼠P選擇素（P-selectin）ELISA試劑盒
樣本收集及儲存：
1. 細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融,。
2. 血清樣本：室溫血液自然凝固 20 min 后,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，保存過程中如有沉淀,，請再次離心，避免反復(fù)凍融,。
3. 血漿樣本：將全血收集到含抗血凝劑的管中,，根據(jù)標本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合 20 min,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復(fù)凍融,。
※注意：
血清血漿樣本避免使用溶血,、高血脂樣本，以免影響檢測結(jié)果,；如果樣本中的靶標物檢測濃度高于標準品的值,，請將樣品做適當(dāng)倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實驗前做預(yù)實驗以確定稀釋倍數(shù),。
試劑準備：
1. 試劑回溫：首先在實驗前 30 min 將試劑盒,，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結(jié)晶,，請放入 37℃溫浴直到結(jié)晶全部溶解,。
2. 配制洗滌液：預(yù)先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應(yīng)用液,，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存,。
3. 標準品梯度稀釋：加入標準品/樣本稀釋液（SR1）1ml凍干標準品中,，靜置15分鐘待其*溶解后輕輕混勻(濃度為4000pg/ml),，然后按照以下濃度： 4000、2000,、1000,、500、250,、125,、62.5、0 pg/ml進行稀釋,。復(fù)溶過的標準品原液（4000pg/ml）未用完的應(yīng)廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,，并將其貯存在-20～-80℃冰箱，具體如下圖,。
4. 生物素化抗體工作液：預(yù)先計算好試驗所需用量,，用檢測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應(yīng)用工作液（稀釋前充分混勻），請在30分鐘內(nèi)加入到反應(yīng)孔中,。
6. 洗滌方法：
? 自動洗板：甩盡酶標板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干，注入洗滌液為 300ul/孔,注與吸出間隔為 30 秒,，洗板 5 次,。
? 手工洗板：甩盡酶標板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干,，用洗瓶加入洗滌液300ul/孔,，靜止 30 秒后甩凈酶標板孔中液體,，在厚迭的吸水紙上拍干，洗板 5 次,。
檢測步驟
P-selectin Mouse ELISA Kit
結(jié)果判斷：
1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值,。選擇雙波長檢測，參考波長為 630 nm,。如不能進行雙波長檢測,，請用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。
2.計算標準品,、樣品的平均 OD 值：每個標準品和標本的 OD 值應(yīng)減去零孔的 OD 值
3.以標準品濃度為橫坐標,，吸光度OD值為縱坐標，用軟件繪制標準曲線,，樣品中P-selectin含量可通過對應(yīng)OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度,。
4.若標本 OD 值高于標準曲線上限，應(yīng)做適當(dāng)稀釋后重新檢測,，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù),。
參數(shù)表征：
2. 靈敏度：低可檢測小鼠 P-selectin 濃度達 30pg/ml，20 個零標準品濃度 OD 的平均值加上兩個標準差,，計算相應(yīng)的可檢測濃度,。
3. 特異性：不與小鼠 E-Selectin、ICAM-1,、ICAM-2,、L-Selectin、VCAM-1 等反應(yīng)
4. 重復(fù)性：板內(nèi),，板間變異系數(shù)<10%
P-selectin ELISA KIT（Mouse）
?常見問題及解決方法：
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