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小鼠血管緊張素轉換酶（ACE）ELISA試劑盒

 

安全提示： 

試劑盒中的終止液為酸性溶液,，操作小鼠員在使用時請帶上手套并注意防護；在操作過程中也要避免 試劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸,，請用大量清水清洗；檢測血液樣本及其它體液樣本時,，請按國家生 物實驗室安全防護有關管理規(guī)定執(zhí)行,。

自備實驗器材（不提供，可代購） 
1． 酶標儀（主波長 450nm,，參考波長 630nm） 
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl 
3． 洗板機或洗瓶 
4． 37℃孵育箱 
5． 雙蒸水,，去離子水，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管 
 

小鼠血管緊張素轉換酶（ACE）ELISA試劑盒

樣本收集及儲存： 
1. 細胞培養(yǎng)上清： 將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝于小 EP 管并于 -20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存）,，避免反復凍融。 
2. 血清樣本： 室溫血液自然凝固 20 min 后,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于 -20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），保存過程中如有沉淀,，請再次離心,，避免反復凍融。 
3. 血漿樣本： 將全血收集到含抗血凝劑的管中,，根據(jù)標本的實際要求選擇 EDTA,，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混 合 20 min,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融,。 
※注意：
血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,，以免影響檢測結果,；如果樣本中的靶標物檢測濃度高 于標準品的值,，請將樣品做適當倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實驗前做預實驗以確定稀釋倍數(shù),。 
 

試劑準備： 
1. 試劑回溫：首先在實驗前 30 min 將試劑盒,，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現(xiàn)結晶,，請放入 37℃溫浴直到結晶全部溶解,。

 2. 配制洗滌液：預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋 成 1 倍應用液,，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存,。

 
3. 標準品梯度稀釋：加入標準品/樣本稀釋液（SR1）500?L凍干標準品中，靜置15分鐘待其*溶解后 輕輕混勻(濃度為6000pg/ml),，按照以下濃度進行2倍稀釋：6000,、3000、1500,、750,、375、187.5,、93.75,、 0pg/ml進行稀釋。6000pg/ml作為標準曲線的點濃度,，標準品/樣本稀釋液（SR1）作為標準曲線的零 點（0pg/ml）,。復溶過的標準品原液（6000pg/ml）未用完的應廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝，并將 其貯存在-20～-80℃冰箱,，具體如下圖

4. 生物素化抗體工作液：預先計算好試驗所需用量,，用檢測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍 應用工作液（稀釋前充分混勻），請在30分鐘內加入到反應孔中,。

5. 酶結合物工作液：按每次試驗所需用量配制,，用酶結合物稀釋液（SR3）將100倍濃縮酶結合物稀釋成1 倍應用工作液（稀釋前離心），請在30分鐘內使用,。

6. 洗滌方法：

? 自動洗板：甩盡酶標板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干，注入洗滌液為 300ul/孔,注 與吸出間隔為 30 秒,，洗板 5 次,。

? 手工洗板：甩盡酶標板孔中液體，在厚迭吸水紙上拍干,，用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,，靜止 30 秒后甩凈酶標板孔中液體，在厚迭的吸水紙上拍干,，洗板 5 次,。

 

小鼠血管緊張素轉換酶

結果判斷： 
1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值,。選擇雙波長檢測，參考波長為 630 nm,。如不能進行雙波長檢測,，請 用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值。 
2.計算標準品,、樣品的平均 OD 值：每個標準品和標本的 OD 值應減去零孔的 OD 值 
3.以標準品濃度為橫坐標,，吸光度OD值為縱坐標，用軟件繪制標準曲線,，樣品中ACE含量可通過對應OD值 由標準曲線換算出相應的濃度,。 
4.若標本 OD 值高于標準曲線上限，應做適當稀釋后重新檢測,，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù),。

2. 靈敏度： 
低可檢測小鼠 ACE 濃度達 45pg/ml， 20 個零標準品濃度 OD 的平均值加上兩個標準差,，計算相應的可檢測濃度,。

3. 特異性： 
不與小鼠的 ACE-2，人的 ACE 等反應 

4. 重復性： 
板內,，板間變異系數(shù)<10%,。 

5. 回收率： 
在選取的健康小鼠血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的小鼠 ACE ,，計算回收率


6. 線性稀釋： 分別在選取的 4 份健康小鼠血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 ACE ,，在標準曲線動力學范圍內進行 稀釋，評估線性

 

小鼠血管緊張素轉換酶酶聯(lián)免疫試劑盒