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大鼠L選擇素（L-Selectin）ELISA試劑盒

背景介紹：

C 反應蛋白(C-reactive protein ,CRP)是指在機體受到感染或組織損傷時血漿中一些急劇上升的蛋白質(zhì)(急性蛋白)。CRP 是一種環(huán)狀五聚體蛋白,，其一級結構包含 5 個相同的亞單位,，亞單位間以非共價鍵相結合，每個亞單位在其表面都含有 CRP 配體結合位點(與配體的結合需Ca 參與),，其另一面含有 Clq 及 FcTR 結合位點,。CRP 可以激活補體和加強吞噬細胞的吞噬而起調(diào)理作用，從而清除入侵機體的病原微生物和損傷，壞死,，凋亡的組織細胞,，在機體的天然免疫過程中發(fā)揮重要的保護作用。

檢測原理：

 Solarbio (Solarbio ®)ELISA 試劑盒采用基于雙抗體夾心法的酶聯(lián)免疫吸附檢測技術,。將抗大鼠 CRP 單克隆抗體包被在酶標板上,；分別加入梯度稀釋的標準品和預稀釋的樣本，標準品和樣本中的大鼠 CRP 會與酶標板上的包被抗體充分結合,；洗板后加入生物素化抗大鼠CRP 抗體,，該抗體會與板子上包被抗體捕獲的標準品和樣本中的大鼠 CRP 發(fā)生特異性結合；洗板后加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素,，生物素與鏈霉親和素會發(fā)生高強度的非共價結合,；洗板后加入顯色劑底物 TMB，若反應孔中樣品存在不同濃度的大鼠 CRP,，則 HRP 會使無色 TMB 變成不同深淺（正相關）的藍色物質(zhì),，加入終止液后反應孔會變成黃色；后,，在 λmax=450 nm（OD=450 nm）處測定反應孔樣品吸光度（OD）,，樣本中的大鼠 CRP 濃度與 OD 成正比，通過繪制標準曲線和四參數(shù)擬合軟件便可計算出樣本中大鼠CRP 的濃度,。

原理圖：

注意事項：※※※

1. 試劑盒應在有效期內(nèi)使用,，請不要使用過期的試劑。

2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱,，已復溶但未用完的標準品,，請丟棄。

3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30 min,，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品,。

4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測，且加入試劑的順序應保持*,。

5. 為避免交叉污染,，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭,，封板膜（※）及潔凈塑料容 器,。.

6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶 蓋上,，使用前請離心處理（5-10 S 即可）,，使管壁上的液體集中在管底部，取用時,，請 用移液器小心吹打幾次,。

7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的 試劑代替本試劑盒中的某單個組分。

8. 為保證結果準確,，每次檢測均需做標準曲線,。

安全提示：試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護,；在操 作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸，請用大量清水清洗,；檢測血液樣本 及其它體液樣本時,，請按國家生物實驗室安全防護有關管理規(guī)定執(zhí)行。

試劑盒組成及儲存：

大鼠L選擇素（L-Selectin）ELISA試劑盒

自備實驗器材（不提供,，可代購）

1． 酶標儀（主波長 450nm,，參考波長 630nm）

2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl

3． 洗板機或洗瓶

4． 37℃孵育箱

5． 雙蒸水，去離子水,，量筒等

6． 稀釋用聚丙烯試管