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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T/48T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | SEKM-0009 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
| 主要用途 | 小鼠IL-9含量測定 |
小鼠白細胞介素9（IL-9）ELISA試劑盒
注意事項：※※※
1. 試劑盒應在有效期內(nèi)使用,，請不要使用過期的試劑,。
2. 試劑盒未使用時應保存在 2-8℃冰箱，已復溶但未用完的標準品,，請丟棄,。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復 30min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品,。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復孔檢測,，且加入試劑的順序應保持*。
5. 為避免交叉污染,，請在試驗中使用 1 次性試管,，槍頭，封板膜（※）及潔凈塑料容器,。.
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結合物的體積較少,，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶 蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部,，取用時,，請 用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試 劑代替本試劑盒中的某單個組分,。
8. 為保證結果準確,，每次檢測均需做標準曲線,。
安全提示：
試劑盒中的終止液為酸性溶液，操作人員在使用時請帶上手套并注意防護,；在操 作過程中也要避免試劑接觸皮膚和眼睛,，如果不慎接觸，請用大量清水清洗,；檢測血液樣本 及其它體液樣本時,，請按國家生物實驗室安全防護有關管理規(guī)定執(zhí)行。
試劑盒組成及儲存
自備實驗器材（不提供,，可代購）
1． 酶標儀（主波長 450nm,，參考波長 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸頭：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板機或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 雙蒸水，去離子水,，量筒等
6． 稀釋用聚丙烯試管
小鼠白細胞介素9（IL-9）ELISA試劑盒
樣本收集及儲存：
1. 細胞培養(yǎng)上清： 將細胞培養(yǎng)基移無菌離心管,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min,然后將上清等量分裝 于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存），避免反復凍融,。
2. 血清樣本： 室溫血液自然凝固 20 min 后,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝 于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，保存過程中如有沉淀,， 請再次離心，避免反復凍融,。
3. 血漿樣本： 將全血收集到含抗血凝劑的管中,，根據(jù)標本的實際要求選擇 EDTA，檸檬酸鈉或肝素作 為抗凝劑,，混合 20 min,，在 4℃條件下 1000×g 離心 10 min，然后將上清等量分裝于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小時內(nèi)檢測可放入 2-8℃儲存）,，避免反復凍融,。
※注意：
血清血漿樣本避免使用溶血、高血脂樣本,，以免影響檢測結果,；如果樣本中的靶標 物檢測濃度高于標準品的值，請將樣品做適當倍數(shù)稀釋后檢測，建議正式實驗前做預實 驗以確定稀釋倍數(shù),。
試劑準備：
1. 試劑回溫：首先在實驗前 30 min 將試劑盒,，待測樣本放置于室溫下，濃縮洗滌液如出現(xiàn) 結晶,，請放入 37℃溫浴直到結晶全部溶解,。
2. 配制洗滌液：預先計算好稀釋后的洗滌液使用體積，然后用雙蒸水或去離子水將 20 倍 濃縮洗滌液稀釋成 1 倍應用液,，未用完的濃縮洗滌液放入 4℃冰箱保存,。
3. 標準品梯度稀釋：加入標準品/樣本稀釋液（SR1）1ml凍干標準品中，靜置15分鐘待 其*溶解后輕輕混勻(濃度為3000pg/ml),，然后按照以下濃度：3000,、1500、750,、375,、 187.5、93.75,、46.8,、 0 pg/ml進行稀釋。復溶過的標準品原液（3000pg/ml）未用完的應 廢棄或根據(jù)需要按照一次用量分裝,，并將其貯存在-20～-80℃冰箱,，具體如下圖。
4. 生物素化抗體工作液：預先計算好試驗所需用量,，用檢測稀釋液（SR2）將100倍抗體濃縮液稀釋成1倍應用工作液（稀釋前充分混勻）,，請在30分鐘內(nèi)加入到反應孔中。
5. 酶結合物工作液：按每次試驗所需用量配制,，用酶結合物稀釋液（SR3）將100倍濃縮酶 結合物稀釋成1倍應用工作液（稀釋前離心）,，請在30分鐘內(nèi)使用。
6. 洗滌方法：
? 自動洗板：甩盡酶標板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干,，注入洗滌液為 300ul/ 孔,注與吸出間隔為 30 秒，洗板 5 次,。
? 手工洗板：甩盡酶標板孔中液體,，在厚迭吸水紙上拍干，用洗瓶加入洗滌液 300ul/孔,，靜止 30 秒后甩凈酶標板孔中液體,，在厚迭的吸水紙上拍干，洗板 5 次,。
IL-9 Mouse ELISA Kit
結果判斷：
1.用酶標儀 450 nm 波長測定 OD 值,。選擇雙波長檢測,，參考波長為 630 nm。如不能進行 雙波長檢測,，請用 450 nm 的 OD 測定值減去 630 nm 的 OD 測定值,。
2.計算標準品、樣品的平均 OD 值：每個標準品和標本的 OD 值應減去零孔的 OD 值
3.以標準品濃度為橫坐標,，吸光度OD值為縱坐標,，用軟件繪制標準曲線，樣品中IL-9含量可 通過對應OD值由標準曲線換算出相應的濃度,。 4.若標本 OD 值高于標準曲線上限,，應做適當稀釋后重新檢測，計算濃度時再乘以稀釋倍數(shù),。
參數(shù)表征：
2. 靈敏度： 低可檢測小鼠 IL-9 濃度達 23pg/ml,， 20 個零標準品濃度 OD 的平均值加上兩個標準差,，計算相應的可檢測濃度,。 3. 特異性： 不與小鼠 IL-9 R/Fc Chimera 反應，人 IL-9 R,、IL-9 等反應 4. 重復性： 板內(nèi),，板間變異系數(shù)<10% 5. 回收率： 在選取的健康小鼠血漿、細胞培養(yǎng)上清中加入 3 個不同濃度水平的小鼠 IL-9,，計算回收率,。
6. 線性稀釋： 分別在選取的 4 份健康小鼠血漿和細胞培養(yǎng)上清中加入高濃度小鼠 IL-9，在標準曲線動力 學范圍內(nèi)進行稀釋,，評估線性,。
小鼠白細胞介素9
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