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土壤亞硝酸還原酶（S-NiR）活性檢測試劑盒說明書

微量法

注意：本產(chǎn)品試劑有所變動,，請注意并嚴格按照該說明書操作。

貨號：BC2995

規(guī)格：100T/48S

產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。

溶液的配制：

1,、 試劑一：臨用前加入1mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存2周,。臨用前根據(jù)用量用蒸餾水稀釋100倍,，現(xiàn)用現(xiàn)配；

2,、 試劑二：臨用前加15mL蒸餾水備用,，2-8℃保存2周；

3,、 試劑三：臨用前加15mL蒸餾水溶解,，此溶液為飽和溶液，取上清使用即可,。用不完的試劑2-8℃保存2周,；

4、 標準品：10μmol/mL 亞*標準液,。

產(chǎn)品說明：

土壤亞硝酸還原酶（Solid-Nitrite reductase,，S-NiR）是反硝化作用中的關鍵酶之一，它是由土壤反硝化細菌產(chǎn)生的一種還原酶類,，可將NO₂^-還原為NO,，它的活性反映了生物降解過程中氮素的轉(zhuǎn)化效率，為氮素轉(zhuǎn)化規(guī)律的研究提供一定的依據(jù),。

亞硝酸還原酶可將NO₂^-還原為NO,，使樣本中參與重氮化反應生成紫紅色化合物的NO₂^-減少，即540nm處吸光值的變化可反應土壤中亞硝酸還原酶的活性,。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗,。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀,、低溫離心機,、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、微量玻璃比色皿/96孔板,、30-50目篩、研缽,、冰和蒸餾水,。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量,，具體比例可以參考文獻）

新鮮土樣自然風干或37℃烘箱烘干,，過30-50目篩,。

二、測定步驟

1,、 分光光度計/酶標儀預熱30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至540nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零,。

2,、 標準液的稀釋：將標準液用蒸餾水稀釋至0.8、0.6,、0.4、0.2,、0.1,、0.05μmol/mL的標準液。

備注：實驗中每個標準管需100µL標準溶液,。

3,、 樣本測定：

三,、S-NiR計算

1. 標準曲線的繪制：

根據(jù)標準管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標準（y,，ΔA標準）,，建立標準曲線。根據(jù)標準曲線,，將ΔA測定（y,，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x,，μmol/mL）。

2. S-NiR的計算：

酶活單位定義：每g土樣每天還原1μmol NO₂^ˉ的量為一個酶活力單位,。

S-NiR（U/g 土樣）=x×V反應÷W÷T=2.4×x÷W

T：反應時間,，3h=1/8d；V反應：反應體系體積,，0.3mL,；W：土樣質(zhì)量，g,。

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