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PCR試劑 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)
貨號:PC1350
規(guī)格 :500U/1000U
濃度 :5U/ul
保存 :-20℃保存, 有效期少一年。
產(chǎn)品簡介 :
Pfu DNA Ploymerase 是從克隆有 Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大腸桿菌中表達并經(jīng)過柱純化分離出來的重組蛋白,,其分子量為 90kD,。由于 Pfu 酶具有 3’→5’核酸外切酶活性,,它能糾正 DNA 擴增過程中產(chǎn)生的錯配,,而傳統(tǒng)的 Taq 酶卻不能,,其它耐熱 DNA Polymerase 如 Vent,、Deep Vent,、Tli、UITma 等雖具有校正功能,, 但 Pfu 酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有耐熱 DNA Polymerase 中出錯率低的,。 Pfu 酶無 5’→3’核酸外切酶活性,PCR 反應(yīng)中的延伸速度一般為 0.5-1kb/min,,比 Taq 酶要低,。Pfu 酶比 Taq 酶熱穩(wěn)定性更好,95 1 ℃ 小時仍保持90%以上的活性,,對于 GC 含量很高的模板,,變性溫度可以提高到 98℃而不影響其活性。Pfu 酶的 PCR 產(chǎn)物為平末端,,可加 A 處理再與 T-載體連接或使用平末端克隆載體,。
活性定義 :
1 單位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定義為在 74℃,30 分鐘內(nèi),,以活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物,,將 10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量,。
質(zhì)量控制 :
SDS-PAGE 檢測 Pfu DNA Polymerase 純度大于 99%; 經(jīng)檢測無外源核酸酶活性,; PCR 方法檢測無宿主殘余DNA,;能有效地擴增人類基因組中的單拷貝基因;室溫存放一周,,無明顯活性改變,。
酶貯存緩沖液 :
50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol;其他成份,。
適用范圍 :
用于 DNA 的高保真擴增,,如基因表達克隆、基因定點突變,、細胞內(nèi)基因點突變的分析(SNP)和末端補平等,。
建議 PCR 體系(以 50µl 反應(yīng)體系為例)
Template <0.5µg
上游引物(10µM) 1µl
下游引物(10µM) 1µl
10×Buffer(含 Mg 2+ ) 5µl
dNTP(各 2.5mM) 4µl
Pfu DNA Polymerase 0.5-1µl
ddH2O up to 50µl
注意事項 :
1,、PCR 反應(yīng)體系加樣時,,后一步加入 Pfu DNA Ploymerase,整個過程宜在冰上操作,。
2,、取 Pfu DNA Ploymerase 做 PCR 反應(yīng)時,請用高壓滅菌處理過的吸頭,。
3,、10×Pfu Buffer 中含 20 mM Mg 2+ ,,如 PCR 反應(yīng)需要較高 Mg 2+ 濃度,,請另行加入。
4,、 用Pfu酶擴增時,, 引物的純度要求較高, 引物長度大于18個堿基,, Tm值在55-80℃之間, 引物濃度在0.1-0.5uM之間,,比 Taq 酶略高,。
相關(guān)產(chǎn)品 :
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PCR試劑 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)訂購說明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨,。
2,、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3,、部分產(chǎn)品價格會因貨期,、批次等因素發(fā)生變化,若有變動以訂貨當(dāng)日新價格為準(zhǔn),。
4,、每日訂單截止時間為16點整,,部分城市可到17點整,,因超過截止時間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5,、請辦理完貨款后,,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址,、姓名,、等以傳真、,、短信,、等形式通知我們,。
PCR試劑 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料)運輸說明:
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