目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC6005-100T/48S谷*甘肽還原酶活性系數(shù)檢測試劑盒 微量法
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
貨號 | BC6005-100T/48S | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 谷胱甘肽還原酶活性系數(shù)檢測 |
谷*甘肽還原酶活性系數(shù)(GRAC)檢測試劑盒說明書
微量法
貨號:BC6005
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員,。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體65 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
試劑三A | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑三B | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體1.2 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑五 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑六 | 液體20 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑七 | 液體25 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1. 試劑二:臨用前加入1.2mL蒸餾水,,充分溶解,2-8℃可保存4周,;
2. 試劑三:臨用前取試劑三A加入0.537mL試劑三B,充分溶解,,-20℃可分裝保存4周,,避免反復(fù)凍融;
3. 工作液:臨用前根據(jù)樣本量按照試劑一:試劑二:試劑三:試劑四=40μL:10μL:4μL:10μL(64μL,,1T)的比例配制工作液,,現(xiàn)用現(xiàn)配;
4. 試劑五:臨用前加入1.2mL蒸餾水,充分溶解,,-20℃可分裝保存4周,避免反復(fù)凍融,;
5. 試劑五工作液:臨用前根據(jù)樣本量按照試劑五:蒸餾水=5μL:95μL(0.1mL,,10T)的比例配制,現(xiàn)用現(xiàn)配,。
產(chǎn)品說明:
谷*甘肽還原酶(Glutathione Reductase,,GR)是廣泛存在于真核與原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,該酶以核黃素衍生物核黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)為輔基,,催化NADPH還原氧化型谷*甘肽(G SSG)生成還原型谷*甘肽(GSH),,維持巰基和膜蛋白處于還原狀態(tài)。當(dāng)生物體內(nèi)缺乏核黃素時,,FAD含量相應(yīng)減少,,GR活性也隨之降低,谷*甘肽還原酶活性系數(shù)(GR Activation Coefficient,,GRAC)迅速升高,,出現(xiàn)唇炎、口角炎,、結(jié)膜炎等臨床癥狀,。因此,GRAC用于核黃素營養(yǎng)狀況評價,,對于早期發(fā)現(xiàn)缺乏病患者采取防治措施具有重要意義,。
GR催化NADPH還原G SSG,生成GSH,,GSH與5,,5’-二硫代-雙-(2-硝 基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid,,DTNB)反應(yīng)產(chǎn)生2-硝基-5-*甲酸,,2-硝基-5-*甲酸在波長412nm處有特征吸收峰,通過412nm處吸光度的變化可計算GR的活性,。根據(jù)加入FAD前后GR活性的變化可計算得到GRAC,。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測,。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀,、低溫離心機(jī)、分析天平,、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱,、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀,、冰和蒸餾水,。
操作步驟:具體的操作步驟請見“產(chǎn)品資料"文件
注意事項:
1. 建議準(zhǔn)備核黃素水平正常的樣本進(jìn)行檢測,方便與核黃素缺乏的樣本進(jìn)行比較,;如果沒有核黃素水平正常的樣本,,可參考一般核黃素水平正常的樣本GRAC為0.9-1.2;
2. 如果樣本測定管吸光值大于1.5,,建議將樣本用試劑一稀釋后進(jìn)行測定,;如果樣本測定管吸光值接近空白管,可適當(dāng)增大樣本質(zhì)量重新提取或提高加樣表中樣本體積,,對照管,、空白管蒸餾水需進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。
3. 樣本蛋白濃度需自行測定,。由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約0.11mg/mL),,所以在測定樣本蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。
實驗實例:
1. 取0.1051g大鼠腎臟樣本,,加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿,,離心后取上清,按照測定步驟操作,,用96孔板測得:A測定=0.370,,A對照=0.360,A空白=0.107,,計算得:
GRAC=(A測定-A空白)÷(A對照-A空白)= 1.040,。
2. 取10μL人紅細(xì)胞,加入990μL試劑一,,充分溶血混勻,,離心后取上清,按照測定步驟操作,,用96孔板測得:A測定=0.479,,A對照=0.461,A空白=0.107,,計算得:
GRAC=(A測定-A空白)÷(A對照-A空白)= 1.051,。
3. 取馬血清樣本,直接按照測定步驟操作,,用96孔板測得:A測定=0.397,,A對照=0.392,A空白=0.107,,計算得:
GRAC=(A測定-A空白)÷(A對照-A空白)= 1.018,。
參考文獻(xiàn):
[1] Sauberlich H E, Judd J H, Nichoalds G E, et al. Application of the erythrocyte glutathione reductase assay in evaluating riboflavin nutritional status in a high school student population [J]. The American Journal of Clinical Nutrition, 1972, 25(8): 756-762.
[2] Gu CF, Chen YZ, Wang ZY. A study of the activation coefficients of blood glutathione reductase in the evaluation of experimental riboflavin deficiency [J]. Acta Nutrimenta Sinica, 1981, 3(4): 251-260.
[3] Ono S, Hirano H. FAD-induced in vitro activation of glutathione reductase in the lens of B2 deficient rats [J]. Current eye research, 1984, 3(4): 663-665.
[4] He J, Hu ML, H YM, et al. Study on the optimum conditions for determination of glutathione reductase activity coefficient in whole blood [J]. Chinese Journal of Public Health, 2002, 18(5): 615-616.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC1160/BC1165 谷*甘肽還原酶(GR)活性檢測試劑盒
BC1170/BC1175 還原型谷*甘肽(GSH)含量檢測試劑盒
BC1180/BC1185 氧化型谷*甘肽(G SSG)含量檢測試劑盒
BC1190/BC1195 谷*甘肽過氧化物酶(GSH-Px/GPX)活性檢測試劑盒
谷*甘肽還原酶活性系數(shù)檢測試劑盒 微量法 谷*甘肽還原酶活性系數(shù)檢測試劑盒 微量法
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