日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

次黃嘌呤

次黃嘌呤應(yīng)用：

生化試劑,，制備生物培養(yǎng)基,，例如HAT選擇性培養(yǎng)基的制備。

次黃嘌呤原理：

在單抗制備中,，由于需要進(jìn)行選擇性殺死非目標(biāo)細(xì)胞,，所以使用添加HAT的選擇性培養(yǎng)基，其依據(jù)是細(xì)胞中的DNA合成有兩條途徑：一條途徑是生物合成途徑（“D途徑”）,，即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,，為DNA分子的合成提供原料,。在此合成過(guò)程中，葉酸作為重要的輔酶參與這一過(guò)程,，而HAT培養(yǎng)液中氨基蝶呤是一種葉酸的拮抗物,，可以阻斷DNA合成的“D途徑”。另一條途徑是應(yīng)急途徑或補(bǔ)救途徑（“S途徑”）,，它是利用次黃嘌呤—鳥(niǎo)嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相應(yīng)的核苷酸,，兩種酶缺一不可。因此,，在HAT培養(yǎng)液中,，未融合的效應(yīng)B細(xì)胞和兩個(gè)效應(yīng)B細(xì)胞融合的“D途徑”被氨基蝶呤阻斷，雖“S途徑”正常,，但因缺乏在體外培養(yǎng)液中增殖的能力,，一般10d左右會(huì)死亡。對(duì)于骨髓瘤細(xì)胞以及自身融合細(xì)胞而言,，由于通常采用的骨髓瘤細(xì)胞是次黃嘌呤—鳥(niǎo)嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶缺陷型（HGPRT）細(xì)胞,，因此自身沒(méi)有“S途徑”，且“D途徑”又被氨基蝶呤阻斷,，所以在HAT培養(yǎng)液中也不能增殖而很快死亡,。只有骨髓瘤細(xì)胞與效應(yīng)B細(xì)胞相互融合形成的雜交瘤細(xì)胞，既具有效應(yīng)B細(xì)胞的“S途徑”,，又具有骨髓瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)液中長(zhǎng)期增殖的特性,，因此能在HAT培養(yǎng)液中選擇性存活下來(lái)，并不斷增殖,。通常HAT中,，H（次黃嘌呤）的濃度為1×10-4M，A（氨基蝶呤）為4×10-7M,，T（胸腺嘧啶）為1.6×10-5M,，在HT培養(yǎng)基中，只需要不加氨基蝶呤,，其它都同HAT。
HAT培養(yǎng)基的配制：
100×A（氨基喋呤） 貯存液：稱取1.76mg氨基喋呤溶于90ml超純水中,，滴加1mol/L的NaOH 0.5ml助溶,，待*溶解后，加1mol/L HCL 0.5ml 中和,，再補(bǔ)加超純水到100ml,。0.22um膜過(guò)濾除菌，小量分裝,，-20℃保存,。
100×HT貯存液：稱取136.1mg次黃嘌呤和38.8mg胸腺嘧啶核苷,，加超純水到100ml，置45-50℃水浴中使*溶解,，0.22μm膜過(guò)濾除菌,，小量分裝，-20℃保存,，臨用前37℃水浴中溶解,。
HT培養(yǎng)基：82ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入1ml HT（100×），1ml SP（100×）,，15ml滅能的犢牛血清,。
HAT培養(yǎng)基：99ml HT培養(yǎng)基加入1ml A（100×）。

  備注：產(chǎn)品信息可能會(huì)有優(yōu)化升級(jí),。請(qǐng)以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn),。