ELISA試劑盒產(chǎn)品的優(yōu)劣主要是從其特異性,,準(zhǔn)確性,度等幾個方面進(jìn)行判斷.由于篇幅關(guān)系,,現(xiàn)對產(chǎn)品特異性進(jìn)行詳細(xì)講解:
特異性指的是在PCR擴(kuò)增過程中,,專一性地擴(kuò)增目的片段而非其他片段的性能。在PCR實驗本身的靈敏度很高,,且實驗條件未充分優(yōu)化的情況,,通常會在目的片段出現(xiàn)的同時伴隨有其他的雜帶,即發(fā)生非特異性擴(kuò)增的現(xiàn)象,。模板,、引物性 質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)條件的控制等均會影響PCR擴(kuò)增的特異性,。近年來的研究結(jié)果表明,,緩沖液的品質(zhì)(如離子種類與組成,反應(yīng)優(yōu)化劑等)對保證PCR的特異性擴(kuò) 增起著不可忽視的作用,。一般的緩沖液中調(diào)節(jié)氫鍵作用的鹽只有KCl,,而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過反應(yīng)優(yōu)化劑以及KCl/(NH4)S
PCR實驗的靈敏度與特異性是一對此長彼消的特性,這也決定我們實驗體系調(diào)節(jié)實際就是找到適合實驗的靈敏度與特異性的平衡點,。由于PCR體系中的眾多成分,,使得組合較多,篩選工作繁雜,。東盛基于靈敏度與特異性分別設(shè)計了PCR Mix和HS Taq Mix,,幫您確定大的平衡點,如果您需要更細(xì)致的平衡點,,請選擇相應(yīng)的Mix Kit系列進(jìn)行微調(diào),。
ELISA操作實驗中的樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量,。加進(jìn)一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加進(jìn)一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
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