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使用目的：本試劑盒用于測定斑馬魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中睪酮（T）含量,。

斑馬魚睪酮（T） ELISA試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中斑馬魚睪酮（T）水平,。用純化的斑馬魚睪酮（T）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入睪酮（T）,，再與HRP標記的睪酮（T）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的睪酮（T）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中斑馬魚睪酮（T）濃度,。

斑馬魚睪酮（T） ELISA試劑盒標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
12nmol/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
6nmol/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
3nmol/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5nmol/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
0.75 nmol/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

斑馬魚睪酮（T） ELISA試劑盒操作步驟
加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
溫育：操作同3,。
 洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。